中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
5期
432-435,440
,共5页
贺菽嘉%肖绍文%罗彬%蓝秀万%林文珍%林永达%谢小薰
賀菽嘉%肖紹文%囉彬%藍秀萬%林文珍%林永達%謝小薰
하숙가%초소문%라빈%람수만%림문진%림영체%사소훈
黑色素瘤相关抗原-D4a%原核表达%纯化%融合蛋白
黑色素瘤相關抗原-D4a%原覈錶達%純化%融閤蛋白
흑색소류상관항원-D4a%원핵표체%순화%융합단백
目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白.方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序.将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经Amylose Resin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定.结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础.
目的:構建腫瘤相關抗原MAGE-D4a的原覈重組體繫,錶達、純化融閤蛋白.方法:PCR法從膠質瘤組織cDNA中擴增MAGE-D4a基因全長編碼區,連接入原覈錶達載體pMAL-c2,篩選、鑒定暘性剋隆併測序.將重組質粒轉化至大腸桿菌Rosetta(DE3)誘導錶達,錶達產物經Amylose Resin親和層析分離純化,併且對純化的融閤蛋白進行質譜鑒定.結果:成功擴增瞭MAGE-D4a基因;重組質粒在Rosetta大腸桿菌中誘導錶達齣MBP/MAGE-D4a融閤蛋白;優化瞭MAGE-D4a原覈錶達體繫的最適條件;蛋白質譜分析結果顯示錶達的基因重組蛋白與目的蛋白相符.結論:穫得瞭高效錶達、可溶性的MAGE-D4a重組蛋白,為抗體的製備及血清學分析奠定瞭基礎.
목적:구건종류상관항원MAGE-D4a적원핵중조체계,표체、순화융합단백.방법:PCR법종효질류조직cDNA중확증MAGE-D4a기인전장편마구,련접입원핵표체재체pMAL-c2,사선、감정양성극륭병측서.장중조질립전화지대장간균Rosetta(DE3)유도표체,표체산물경Amylose Resin친화층석분리순화,병차대순화적융합단백진행질보감정.결과:성공확증료MAGE-D4a기인;중조질립재Rosetta대장간균중유도표체출MBP/MAGE-D4a융합단백;우화료MAGE-D4a원핵표체체계적최괄조건;단백질보분석결과현시표체적기인중조단백여목적단백상부.결론:획득료고효표체、가용성적MAGE-D4a중조단백,위항체적제비급혈청학분석전정료기출.
