温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2010年
4期
319-321
,共3页
张琴%薛向阳%夏克栋%李文姝%陈韶%张丽芳
張琴%薛嚮暘%夏剋棟%李文姝%陳韶%張麗芳
장금%설향양%하극동%리문주%진소%장려방
疱疹病毒4型,人%潜伏膜蛋白2A%pGEX-4T-1%原核表达%重组,遗传
皰疹病毒4型,人%潛伏膜蛋白2A%pGEX-4T-1%原覈錶達%重組,遺傳
포진병독4형,인%잠복막단백2A%pGEX-4T-1%원핵표체%중조,유전
目的:构建含EB病毒(Epstein -Barr virus,EBV)潜伏膜蛋白(LMP)2A N端1-119基因的重组质粒,探讨其在原核表达系统中的表达情况.方法:采用RT-PCR方法从B95-8细胞中获得LMP2A1-119 外显子基因片段,并克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达融合蛋白, 通过Ni-NTA离子交换柱层析纯化,进一步采用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果:pGEX/LMP2A1-119重组质粒构建成功,并在大肠杆菌中得到表达.SDS -PAGE结果表明表达产物相对分子质量约为50 kD, West-ern blot结果证实其为目的蛋白.结论:EBV LMP2A1-119蛋白可在pGEX-4T-1原核表达系统中表达,为进一步研究其免疫学特性打下了基础.
目的:構建含EB病毒(Epstein -Barr virus,EBV)潛伏膜蛋白(LMP)2A N耑1-119基因的重組質粒,探討其在原覈錶達繫統中的錶達情況.方法:採用RT-PCR方法從B95-8細胞中穫得LMP2A1-119 外顯子基因片段,併剋隆到pGEX-4T-1原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL21(DE3)後,經IPTG誘導錶達融閤蛋白, 通過Ni-NTA離子交換柱層析純化,進一步採用SDS-PAGE和Western blot鑒定.結果:pGEX/LMP2A1-119重組質粒構建成功,併在大腸桿菌中得到錶達.SDS -PAGE結果錶明錶達產物相對分子質量約為50 kD, West-ern blot結果證實其為目的蛋白.結論:EBV LMP2A1-119蛋白可在pGEX-4T-1原覈錶達繫統中錶達,為進一步研究其免疫學特性打下瞭基礎.
목적:구건함EB병독(Epstein -Barr virus,EBV)잠복막단백(LMP)2A N단1-119기인적중조질립,탐토기재원핵표체계통중적표체정황.방법:채용RT-PCR방법종B95-8세포중획득LMP2A1-119 외현자기인편단,병극륭도pGEX-4T-1원핵표체재체,전화대장간균BL21(DE3)후,경IPTG유도표체융합단백, 통과Ni-NTA리자교환주층석순화,진일보채용SDS-PAGE화Western blot감정.결과:pGEX/LMP2A1-119중조질립구건성공,병재대장간균중득도표체.SDS -PAGE결과표명표체산물상대분자질량약위50 kD, West-ern blot결과증실기위목적단백.결론:EBV LMP2A1-119단백가재pGEX-4T-1원핵표체계통중표체,위진일보연구기면역학특성타하료기출.
