西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
5期
1683-1688
,共6页
严玉霖%高洪%陈玲%陈培富%杨建发%孙文汇%高利波%赵汝
嚴玉霖%高洪%陳玲%陳培富%楊建髮%孫文彙%高利波%趙汝
엄옥림%고홍%진령%진배부%양건발%손문회%고리파%조여
猪繁殖与呼吸综合征病毒%非结构蛋白2%单克隆抗体
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%非結構蛋白2%單剋隆抗體
저번식여호흡종합정병독%비결구단백2%단극륭항체
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板,通过RT-PCR扩增编码非结构蛋白2 (Nsp2)的基因,插入到pET32a表达载体中并在大肠埃希氏菌中进行表达.SDS-PAGE电泳结果显示融合表达的Nsp2分子量约为68 kDa,Western blotting分析该融合蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应.纯化融合表达产物Nsp2,按100 μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以Nsp2和His-Tag为抗原,通过间接EL ISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆.经过3次亚克隆后,最终得到了6株能稳定分泌抗Nsp2抗体的阳性细胞克隆株.间接免疫荧光试验、Western blotting和间接ELISA试验鉴定这6株单克隆抗体均能够特异、单一地识别Nsp2,亚型鉴定结果显示6株单抗均属IgG2a型,其轻链均为κ链.所制备的这些单抗将为鉴定PRRSV Nsp2的B细胞抗原表位以及分析该蛋白的结构和功能奠定基础.
以豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)為模闆,通過RT-PCR擴增編碼非結構蛋白2 (Nsp2)的基因,插入到pET32a錶達載體中併在大腸埃希氏菌中進行錶達.SDS-PAGE電泳結果顯示融閤錶達的Nsp2分子量約為68 kDa,Western blotting分析該融閤蛋白能與PRRSV暘性血清髮生特異性反應.純化融閤錶達產物Nsp2,按100 μg/隻的劑量與等量弗氏佐劑乳化,經腹腔免疫BALB/c小鼠3次後,取脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融閤,分彆以Nsp2和His-Tag為抗原,通過間接EL ISA方法對融閤細胞的上清液進行檢測,篩選暘性剋隆.經過3次亞剋隆後,最終得到瞭6株能穩定分泌抗Nsp2抗體的暘性細胞剋隆株.間接免疫熒光試驗、Western blotting和間接ELISA試驗鑒定這6株單剋隆抗體均能夠特異、單一地識彆Nsp2,亞型鑒定結果顯示6株單抗均屬IgG2a型,其輕鏈均為κ鏈.所製備的這些單抗將為鑒定PRRSV Nsp2的B細胞抗原錶位以及分析該蛋白的結構和功能奠定基礎.
이저번식여호흡종합정병독(PRRSV)위모판,통과RT-PCR확증편마비결구단백2 (Nsp2)적기인,삽입도pET32a표체재체중병재대장애희씨균중진행표체.SDS-PAGE전영결과현시융합표체적Nsp2분자량약위68 kDa,Western blotting분석해융합단백능여PRRSV양성혈청발생특이성반응.순화융합표체산물Nsp2,안100 μg/지적제량여등량불씨좌제유화,경복강면역BALB/c소서3차후,취비세포여SP2/0골수류세포진행융합,분별이Nsp2화His-Tag위항원,통과간접EL ISA방법대융합세포적상청액진행검측,사선양성극륭.경과3차아극륭후,최종득도료6주능은정분비항Nsp2항체적양성세포극륭주.간접면역형광시험、Western blotting화간접ELISA시험감정저6주단극륭항체균능구특이、단일지식별Nsp2,아형감정결과현시6주단항균속IgG2a형,기경련균위κ련.소제비적저사단항장위감정PRRSV Nsp2적B세포항원표위이급분석해단백적결구화공능전정기출.
