肝脏
肝髒
간장
CHINESE HEPATOLOGY
2011年
6期
452-456
,共5页
高斯媛%甘厦%郭威%武泽光%宁琴%齐俊英
高斯媛%甘廈%郭威%武澤光%寧琴%齊俊英
고사원%감하%곽위%무택광%저금%제준영
肝功能衰竭%Survivin%pGC-FU
肝功能衰竭%Survivin%pGC-FU
간공능쇠갈%Survivin%pGC-FU
目的 构建pGC-FU-survivin慢病毒质粒,旨在下一步实验中利用survivin蛋白的表达影响原代肝细胞的增殖.方法 从高表达survivin的小鼠淋巴瘤细胞株YAC-I中获取存活素(survivin)基因,连接到pcDNA3.1(+)质粒上,双酶切及双向测序鉴定.构建pGC-FU-survivin慢病毒载体,从基因水平和蛋白质水平鉴定含有survivin的目的片段表达.经包装、纯化,获得效价较高的病毒颗粒进行下一步生物学功能研究.结果 双酶切及测序证实从YAC-I中获得的survivin基因连接到pcDNA3.1(+)质粒上,除第317位碱基由腺苷酸突变为胸腺嘧啶外,其余均与NCBI基因文库中survivin基因切合,该突变不影响蛋白质空间结构及蛋白质生理功能.构建pGC-FU-survivin表达质粒的阳性克隆菌株转染293T细胞后,荧光显微镜下观察可见绿色荧光,Western blot结果见一与标准品大小相同的条带.在293T细胞中进行病毒包装,最终纯化出pGC-FU-survivin慢病毒颗粒.结论 借助T载体及pcDNA3.1(+)质粒,成功地在pGC-FU慢病毒表达质粒上建立了pGC-FU-survivin慢病毒表达质粒.
目的 構建pGC-FU-survivin慢病毒質粒,旨在下一步實驗中利用survivin蛋白的錶達影響原代肝細胞的增殖.方法 從高錶達survivin的小鼠淋巴瘤細胞株YAC-I中穫取存活素(survivin)基因,連接到pcDNA3.1(+)質粒上,雙酶切及雙嚮測序鑒定.構建pGC-FU-survivin慢病毒載體,從基因水平和蛋白質水平鑒定含有survivin的目的片段錶達.經包裝、純化,穫得效價較高的病毒顆粒進行下一步生物學功能研究.結果 雙酶切及測序證實從YAC-I中穫得的survivin基因連接到pcDNA3.1(+)質粒上,除第317位堿基由腺苷痠突變為胸腺嘧啶外,其餘均與NCBI基因文庫中survivin基因切閤,該突變不影響蛋白質空間結構及蛋白質生理功能.構建pGC-FU-survivin錶達質粒的暘性剋隆菌株轉染293T細胞後,熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光,Western blot結果見一與標準品大小相同的條帶.在293T細胞中進行病毒包裝,最終純化齣pGC-FU-survivin慢病毒顆粒.結論 藉助T載體及pcDNA3.1(+)質粒,成功地在pGC-FU慢病毒錶達質粒上建立瞭pGC-FU-survivin慢病毒錶達質粒.
목적 구건pGC-FU-survivin만병독질립,지재하일보실험중이용survivin단백적표체영향원대간세포적증식.방법 종고표체survivin적소서림파류세포주YAC-I중획취존활소(survivin)기인,련접도pcDNA3.1(+)질립상,쌍매절급쌍향측서감정.구건pGC-FU-survivin만병독재체,종기인수평화단백질수평감정함유survivin적목적편단표체.경포장、순화,획득효개교고적병독과립진행하일보생물학공능연구.결과 쌍매절급측서증실종YAC-I중획득적survivin기인련접도pcDNA3.1(+)질립상,제제317위감기유선감산돌변위흉선밀정외,기여균여NCBI기인문고중survivin기인절합,해돌변불영향단백질공간결구급단백질생리공능.구건pGC-FU-survivin표체질립적양성극륭균주전염293T세포후,형광현미경하관찰가견록색형광,Western blot결과견일여표준품대소상동적조대.재293T세포중진행병독포장,최종순화출pGC-FU-survivin만병독과립.결론 차조T재체급pcDNA3.1(+)질립,성공지재pGC-FU만병독표체질립상건립료pGC-FU-survivin만병독표체질립.
