CAJ | 학술논문

目的:研究三磷酸腺苷(ATP)对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制.方法:取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理; (2)ATP组:接种24 h后行ATP处理; (3)KN-62 (P2X7受体阻断剂)干预组:KN-62孵育30 min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程.XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X7受体表达;Western blotting检测细胞P2X7受体蛋白水平;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量.结果:500 μmol/L ATP和1 mmol/L ATP对细胞活力损伤程度较小,作用24 h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%.当ATP浓度达到或高于2 mmol/L时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组.细胞周期及凋亡检测结果显示,ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P<0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P<0.01).免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X7受体的表达分布没有影响.Western blotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X7受体蛋白水平没有明显差异(P＞0.05).ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用.结论:高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制可能与P2X7受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关.
목적:연구삼린산선감(ATP)대N9소효질세포적손상작용급기궤제.방법:취대수생장기N9소효질세포,수궤분위3조:(1)정상대조조:상규배양,불진행ATP처리; (2)ATP조:접충24 h후행ATP처리; (3)KN-62 (P2X7수체조단제)간예조:KN-62부육30 min후행ATP처리,차KN-62존재우ATP작용정개과정.XTT법측각조N9소효질세포적활력;도치상차현미경관찰세포형태변화;류식세포술검측세포주기급조망;세포면역형광검측P2X7수체표체;Western blotting검측세포P2X7수체단백수평;ELISA검측세포상청액중백세포개소1β(IL-1β)함량.결과:500 μmol/L ATP화1 mmol/L ATP대세포활력손상정도교소,작용24 h후,세포활력잉가체88.5%±5.5%화88.2%±8.4%.당ATP농도체도혹고우2 mmol/L시,세포활력신속강저,세포발생추축,차수ATP작용시간연장,세포활력축점강저,세포밀도축점감소,세포추축정도가중,이KN-62간예후세포활력교ATP조명현증다,세포밀도급형태명현호우ATP조.세포주기급조망검측결과현시,ATP가사세포주기조체우S기,세포조망비례명현교대조조증다(P<0.01),KN-62간예가현저감경ATP인기적세포주기조체,세포조망비례현저감소(P<0.01).면역형광현시,ATP급KN-62간예대N9소효질세포상P2X7수체적표체분포몰유영향.Western blotting현시,정상대조조、ATP조급KN-62간예조간P2X7수체단백수평몰유명현차이(P＞0.05).ELISA결과현시,ATP급KN-62간예대IL-1β적석방몰유작용.결론:고제량ATP가유발N9소효질세포손상,기궤제가능여P2X7수체개도적세포주기조체화세포조망유관,이여소효질세포적염증반응무관.