华南预防医学
華南預防醫學
화남예방의학
SOUTH CHINA JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2005年
3期
1-5
,共5页
柯昌文%李天成%武田直和
柯昌文%李天成%武田直和
가창문%리천성%무전직화
肝炎病毒,戊型%基因,病毒%抗原抗体反应
肝炎病毒,戊型%基因,病毒%抗原抗體反應
간염병독,무형%기인,병독%항원항체반응
目的表达戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅳ型(G4)结构蛋白ORF2 截短的基因片段,观察病毒样颗粒(VLP)的装配情况,对纯化的VLP进行抗原性分析.方法为了制备HEV病毒样颗粒,将结构蛋白ORF2的N末端111个氨基酸残基截掉,然后将112至660共549个氨基酸残基的基因与杆状病毒基因重组,在昆虫细胞Tn5表达.首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blotting检测基因是否正确表达,再用超速离心检测是否形成病毒样颗粒,最后用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原特异性.结果含有截掉了N末端111个氨基酸残基的HEV G4的ORF2基因的重组杆状病毒感染昆虫细胞Tn5,除了可以表达最初的产物(相对分子质量为58×103的蛋白分子)外,也产生了一些可能经过宿主细胞酶类处理的蛋白分子,相对分子质量分别为57×103、56×103和54×103,并分泌到培养液中.经超速离心和密度梯度离心,电镜观察发现只有54×103的蛋白分子可以自行组装成VLP,颗粒直径为23～24 nm,浮密度为1.285 g/cm3,与HEV G1比较,G4 VLP具有相同的大小和浮密度,但表达量低.G4 VLP与HEV病人血清可以发生抗原抗体反应,用G4 VLP作抗原可以检测HEV的G1、G3、G4型特异性IgM和IgG抗体.结论该研究证实截短的HEV G4的ORF2结构蛋白基因可以在重组杆状病毒表达系统高效表达.形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备抗HEV诊断试剂和开发预防用疫苗.
目的錶達戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅳ型(G4)結構蛋白ORF2 截短的基因片段,觀察病毒樣顆粒(VLP)的裝配情況,對純化的VLP進行抗原性分析.方法為瞭製備HEV病毒樣顆粒,將結構蛋白ORF2的N末耑111箇氨基痠殘基截掉,然後將112至660共549箇氨基痠殘基的基因與桿狀病毒基因重組,在昆蟲細胞Tn5錶達.首先用聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western Blotting檢測基因是否正確錶達,再用超速離心檢測是否形成病毒樣顆粒,最後用免疫電鏡和ELISA分析病毒樣顆粒的抗原特異性.結果含有截掉瞭N末耑111箇氨基痠殘基的HEV G4的ORF2基因的重組桿狀病毒感染昆蟲細胞Tn5,除瞭可以錶達最初的產物(相對分子質量為58×103的蛋白分子)外,也產生瞭一些可能經過宿主細胞酶類處理的蛋白分子,相對分子質量分彆為57×103、56×103和54×103,併分泌到培養液中.經超速離心和密度梯度離心,電鏡觀察髮現隻有54×103的蛋白分子可以自行組裝成VLP,顆粒直徑為23～24 nm,浮密度為1.285 g/cm3,與HEV G1比較,G4 VLP具有相同的大小和浮密度,但錶達量低.G4 VLP與HEV病人血清可以髮生抗原抗體反應,用G4 VLP作抗原可以檢測HEV的G1、G3、G4型特異性IgM和IgG抗體.結論該研究證實截短的HEV G4的ORF2結構蛋白基因可以在重組桿狀病毒錶達繫統高效錶達.形成的VLP具有HEV病毒顆粒類似的抗原活性,可用于製備抗HEV診斷試劑和開髮預防用疫苗.
목적표체무형간염병독(HEV)기인Ⅳ형(G4)결구단백ORF2 절단적기인편단,관찰병독양과립(VLP)적장배정황,대순화적VLP진행항원성분석.방법위료제비HEV병독양과립,장결구단백ORF2적N말단111개안기산잔기절도,연후장112지660공549개안기산잔기적기인여간상병독기인중조,재곤충세포Tn5표체.수선용취병희선알응효전영화Western Blotting검측기인시부정학표체,재용초속리심검측시부형성병독양과립,최후용면역전경화ELISA분석병독양과립적항원특이성.결과함유절도료N말단111개안기산잔기적HEV G4적ORF2기인적중조간상병독감염곤충세포Tn5,제료가이표체최초적산물(상대분자질량위58×103적단백분자)외,야산생료일사가능경과숙주세포매류처리적단백분자,상대분자질량분별위57×103、56×103화54×103,병분비도배양액중.경초속리심화밀도제도리심,전경관찰발현지유54×103적단백분자가이자행조장성VLP,과립직경위23～24 nm,부밀도위1.285 g/cm3,여HEV G1비교,G4 VLP구유상동적대소화부밀도,단표체량저.G4 VLP여HEV병인혈청가이발생항원항체반응,용G4 VLP작항원가이검측HEV적G1、G3、G4형특이성IgM화IgG항체.결론해연구증실절단적HEV G4적ORF2결구단백기인가이재중조간상병독표체계통고효표체.형성적VLP구유HEV병독과립유사적항원활성,가용우제비항HEV진단시제화개발예방용역묘.
