CAJ | 학술논문

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用.方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成.选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞.取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10 mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100 mg/L釉基质蛋白,用含10 ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制.将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24 h后按实验分组更换诱导液.逐日倒置显微镜下观察细胞形态.第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达.结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异.②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比.对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深.未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色.设立的空白对照和阴性对照均未见着色.③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91 ±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均＜0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P＜0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P＜0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P＜0.01).结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白.釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化. 目的:檢測釉基質蛋白作用下牙週膜成纖維細胞閤成蛋白的變化,分析釉基質蛋白促進牙週組織再生的作用.方法:實驗于2004-04/08在第四軍醫大學口腔醫院組織工程實驗室完成.選取11～14歲兒童因正畸需要拔除的無牙週病及齲病的健康新鮮前磨牙,銳利刀片颳除牙根頸部1/3牙齦及牙週膜,採用全牙膠原酶消化法培養穫得牙週膜成纖維細胞,經免疫細胞化學檢測證實為外胚間充質細胞.取第3代細胞用于實驗,分為2組:對照組為含10 mL/L新生牛血清的低糖DMEM培養液,實驗組為100 mg/L釉基質蛋白,用含10 ml/L新生牛血清的低糖DMEM培養液配製.將第3代人牙週膜成纖維細胞製備成密度為1×104/mL的細胞懸液,接種入預先放置有細胞爬片的6孔闆中,24 h後按實驗分組更換誘導液.逐日倒置顯微鏡下觀察細胞形態.第3,7天利用免疫組化方法和圖像分析技術檢測兩種細胞骨涎蛋白、骨橋蛋白、骨粘連蛋白、牙骨質附著蛋白的錶達.結果:①細胞形態學觀察:加入誘導因子初期細胞形態無明顯變化,隨時間延長,實驗組細胞突起逐漸變短,與對照組相比有明顯差異.②免疫細胞化學檢測結果:對照組骨涎蛋白、骨橋蛋白呈弱暘性到暘性錶達,實驗組與對照組相比,骨涎蛋白、骨橋蛋白均呈現不同程度胞漿著色加深,與作用時間成正比.對照組細胞骨粘連蛋白基本為陰性錶達,而實驗組細胞第3天時即檢測到瞭骨粘連蛋白的錶達,且隨時間的延長染色加深.未經釉基質蛋白處理的牙骨質附著蛋白抗體為陰性錶達,經過釉基質蛋白作用第3,7天均檢測到牙骨質附著蛋白抗體的弱暘性錶達,胞漿著色呈淡棕黃色.設立的空白對照和陰性對照均未見著色.③釉基質蛋白對人牙週膜成纖維細胞閤成骨涎蛋白、骨橋蛋白、骨粘連蛋白的影響:與對照組比較,實驗組第3,7天骨涎蛋白和骨橋蛋白均明顯上調(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91 ±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均＜0.01),骨粘連蛋白對照組未錶達,實驗組第3天時檢測到錶達;實驗組第7天骨涎蛋白、骨橋蛋白、骨粘連蛋白上調幅度均明顯高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P＜0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P＜0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P＜0.01).結論:釉基質蛋白對人牙週膜成纖維細胞具有上調骨涎蛋白、骨橋蛋白、骨粘連蛋白的作用,隨時間延長這種促進作用愈明顯;併能誘導細胞錶達牙骨質附著蛋白.釉基質蛋白在一定濃度下可使人牙週膜成纖維細胞嚮成骨、成牙骨質樣細胞分化.
목적:검측유기질단백작용하아주막성섬유세포합성단백적변화,분석유기질단백촉진아주조직재생적작용.방법:실험우2004-04/08재제사군의대학구강의원조직공정실험실완성.선취11～14세인동인정기수요발제적무아주병급우병적건강신선전마아,예리도편괄제아근경부1/3아간급아주막,채용전아효원매소화법배양획득아주막성섬유세포,경면역세포화학검측증실위외배간충질세포.취제3대세포용우실험,분위2조:대조조위함10 mL/L신생우혈청적저당DMEM배양액,실험조위100 mg/L유기질단백,용함10 ml/L신생우혈청적저당DMEM배양액배제.장제3대인아주막성섬유세포제비성밀도위1×104/mL적세포현액,접충입예선방치유세포파편적6공판중,24 h후안실험분조경환유도액.축일도치현미경하관찰세포형태.제3,7천이용면역조화방법화도상분석기술검측량충세포골연단백、골교단백、골점련단백、아골질부착단백적표체.결과:①세포형태학관찰:가입유도인자초기세포형태무명현변화,수시간연장,실험조세포돌기축점변단,여대조조상비유명현차이.②면역세포화학검측결과:대조조골연단백、골교단백정약양성도양성표체,실험조여대조조상비,골연단백、골교단백균정현불동정도포장착색가심,여작용시간성정비.대조조세포골점련단백기본위음성표체,이실험조세포제3천시즉검측도료골점련단백적표체,차수시간적연장염색가심.미경유기질단백처리적아골질부착단백항체위음성표체,경과유기질단백작용제3,7천균검측도아골질부착단백항체적약양성표체,포장착색정담종황색.설립적공백대조화음성대조균미견착색.③유기질단백대인아주막성섬유세포합성골연단백、골교단백、골점련단백적영향:여대조조비교,실험조제3,7천골연단백화골교단백균명현상조(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91 ±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P균＜0.01),골점련단백대조조미표체,실험조제3천시검측도표체;실험조제7천골연단백、골교단백、골점련단백상조폭도균명현고우제3천(163.91±5.86,168.20±6.93,P＜0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P＜0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P＜0.01).결론:유기질단백대인아주막성섬유세포구유상조골연단백、골교단백、골점련단백적작용,수시간연장저충촉진작용유명현;병능유도세포표체아골질부착단백.유기질단백재일정농도하가사인아주막성섬유세포향성골、성아골질양세포분화.