复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2006年
5期
622-625
,共4页
冯美卿%史训龙%孙传文%周伟%周珮
馮美卿%史訓龍%孫傳文%週偉%週珮
풍미경%사훈룡%손전문%주위%주패
D-氨基酸氧化酶%毕赤酵母%表达%快速纯化
D-氨基痠氧化酶%畢赤酵母%錶達%快速純化
D-안기산양화매%필적효모%표체%쾌속순화
目的 建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA).方法 通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌.结果 高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L.并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物.纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性.结论 利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序.
目的 建立簡便、快速純化D-氨基痠氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高純度的DAAO轉化頭孢菌素C製備戊二酰-7-氨基頭孢黴烷痠(GL-7ACA).方法 通過基因工程手段,構建N耑和C耑各鑲嵌6箇組氨痠的DAAO重組質粒,電轉化Pichia pastoris GS115電感受態細胞,利用PCR方法篩選暘性轉化子,再經甲醇誘導篩選齣高錶達菌.結果 高錶達重組菌(PHD12)搖瓶髮酵單位達到2 000 IU/L,髮酵罐內達到22 500 IU/L.併利用Ni螯閤型樹脂對錶達的DAAO經一步分離純化,以60%的總收率穫得純化產物.純化產物保持良好的轉化CPC-Na活性.結論 利用基因工程錶達組氨痠標記蛋白,可簡化基因工程的下遊工序.
목적 건립간편、쾌속순화D-안기산양화매(DAAO)적신방법,이이용고순도적DAAO전화두포균소C제비무이선-7-안기두포매완산(GL-7ACA).방법 통과기인공정수단,구건N단화C단각양감6개조안산적DAAO중조질립,전전화Pichia pastoris GS115전감수태세포,이용PCR방법사선양성전화자,재경갑순유도사선출고표체균.결과 고표체중조균(PHD12)요병발효단위체도2 000 IU/L,발효관내체도22 500 IU/L.병이용Ni오합형수지대표체적DAAO경일보분리순화,이60%적총수솔획득순화산물.순화산물보지량호적전화CPC-Na활성.결론 이용기인공정표체조안산표기단백,가간화기인공정적하유공서.
