中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2010年
10期
1046-1049
,共4页
徐宏勇%徐立%李开宗%窦科峰
徐宏勇%徐立%李開宗%竇科峰
서굉용%서립%리개종%두과봉
单链抗体片段%CD28%pEGFP-C3载体%肿瘤相关糖蛋白72%转染
單鏈抗體片段%CD28%pEGFP-C3載體%腫瘤相關糖蛋白72%轉染
단련항체편단%CD28%pEGFP-C3재체%종류상관당단백72%전염
目的 构建含有由抗肿瘤相关糖蛋白72(anti-TAG72)单链抗体片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞内区及跨膜区的融合基因anti-TAG72 scFv-CD28的重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28,并转染获得嵌合锚定T淋巴细胞.方法 将anti-TAG72单链抗体及CD28胞内区及跨膜区基因的嵌合锚定融合分子克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C3,获得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28表达载体.用卡那霉素筛选阳性克隆,经酶切和测序鉴定.将上述重组质粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂质体法瞬时转染外周血单核细胞(PBMC),以获得嵌合锚定T淋巴细胞,用荧光显微镜检测嵌合分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的表达,并检验嵌合锚定融合分子anti-TAG72 scFv-CD28的表达.结果 重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段为1002 bp,与已知的序列相符.酶切、测序结果表明,嵌合锚定融合分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正确插入pEGFP-C3载体;转染后anti-TAG72 scFv-CD28片段及绿色荧光物质表达于嵌合锚定T淋巴细胞胞膜表面及胞浆中,为绿色荧光显色.结论 完成了绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的构建,并成功在PBMC瞬时表达.
目的 構建含有由抗腫瘤相關糖蛋白72(anti-TAG72)單鏈抗體片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞內區及跨膜區的融閤基因anti-TAG72 scFv-CD28的重組綠色熒光錶達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28,併轉染穫得嵌閤錨定T淋巴細胞.方法 將anti-TAG72單鏈抗體及CD28胞內區及跨膜區基因的嵌閤錨定融閤分子剋隆入綠色熒光蛋白真覈錶達載體pEGFP-C3,穫得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28錶達載體.用卡那黴素篩選暘性剋隆,經酶切和測序鑒定.將上述重組質粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂質體法瞬時轉染外週血單覈細胞(PBMC),以穫得嵌閤錨定T淋巴細胞,用熒光顯微鏡檢測嵌閤分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的錶達,併檢驗嵌閤錨定融閤分子anti-TAG72 scFv-CD28的錶達.結果 重組綠色熒光錶達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段為1002 bp,與已知的序列相符.酶切、測序結果錶明,嵌閤錨定融閤分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正確插入pEGFP-C3載體;轉染後anti-TAG72 scFv-CD28片段及綠色熒光物質錶達于嵌閤錨定T淋巴細胞胞膜錶麵及胞漿中,為綠色熒光顯色.結論 完成瞭綠色熒光錶達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的構建,併成功在PBMC瞬時錶達.
목적 구건함유유항종류상관당단백72(anti-TAG72)단련항체편단(single chain variable fragment,scFv)급CD28포내구급과막구적융합기인anti-TAG72 scFv-CD28적중조록색형광표체재체pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28,병전염획득감합묘정T림파세포.방법 장anti-TAG72단련항체급CD28포내구급과막구기인적감합묘정융합분자극륭입록색형광단백진핵표체재체pEGFP-C3,획득pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28표체재체.용잡나매소사선양성극륭,경매절화측서감정.장상술중조질립pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28이지질체법순시전염외주혈단핵세포(PBMC),이획득감합묘정T림파세포,용형광현미경검측감합분자anti-TAG72 scFv-CD28재PBMC중적표체,병검험감합묘정융합분자anti-TAG72 scFv-CD28적표체.결과 중조록색형광표체재체pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28중anti-TAG72 scFv-CD28편단위1002 bp,여이지적서렬상부.매절、측서결과표명,감합묘정융합분자기인편단anti-TAG72 scFv-CD28피정학삽입pEGFP-C3재체;전염후anti-TAG72 scFv-CD28편단급록색형광물질표체우감합묘정T림파세포포막표면급포장중,위록색형광현색.결론 완성료록색형광표체재체pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28적구건,병성공재PBMC순시표체.
