中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2011年
6期
791-797
,共7页
齐元麟%纪明开%谢群%黄清玲%林建银
齊元麟%紀明開%謝群%黃清玲%林建銀
제원린%기명개%사군%황청령%림건은
蛇毒%半胱氨酸蛋白酶抑制剂%黑色素瘤%小鼠%蛋白质组学%基因本体学
蛇毒%半胱氨痠蛋白酶抑製劑%黑色素瘤%小鼠%蛋白質組學%基因本體學
사독%반광안산단백매억제제%흑색소류%소서%단백질조학%기인본체학
目的 研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制.方法 采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析.结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调.这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等.Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致.基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关.结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用.sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体.
目的 研究蛇毒半胱氨痠蛋白酶抑製劑(sv-cystatin)基因轉染對小鼠黑素瘤細胞B16F1的蛋白錶達譜的影響,探討其抗腫瘤機製.方法 採用雙嚮電泳-質譜的蛋白質組學研究策略,分析穩定錶達sv-cystatin的B16F1細胞繫B16F1/cystatin與轉染空載體的對照細胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白錶達譜的差彆,篩選鑒定差異錶達蛋白;用實時定量PCR和Western blot進一步確定實驗結果;對蛋白組數據和前期基因組數據進行比較分析.結果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1細胞總蛋白的雙嚮電泳圖譜上共有匹配蛋白點(412±20)箇,其中有11箇蛋白的錶達差異在2倍以上,5箇上調,6箇下調.這11箇蛋白和1箇僅在B16F1/cystatin中錶達的蛋白經MALDI-TOF-MS分析,其中10箇蛋白得到瞭鑒定,它們分屬于代謝酶繫、小G蛋白Ran調控分子、真覈翻譯因子、覈苷痠激酶等.Western blot顯示NM23和RhoGDI-beta的蛋白錶達分彆上調瞭(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;實時定量PCR結果顯示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA錶達上調,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1錶達下調;與蛋白質組學研究結果一緻.基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于細胞外週、質膜和細胞覈,與轉錄、半胱氨痠蛋白酶活性、細胞凋亡等過程有關.結論 sv-cystatin可能通過調控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白質髮揮其抗腫瘤作用.sv-cystatin的主要靶分子可能是轉錄因子、分泌蛋白和質膜受體.
목적 연구사독반광안산단백매억제제(sv-cystatin)기인전염대소서흑소류세포B16F1적단백표체보적영향,탐토기항종류궤제.방법 채용쌍향전영-질보적단백질조학연구책략,분석은정표체sv-cystatin적B16F1세포계B16F1/cystatin여전염공재체적대조세포B16F1/pcDNA3.1적단백표체보적차별,사선감정차이표체단백;용실시정량PCR화Western blot진일보학정실험결과;대단백조수거화전기기인조수거진행비교분석.결과 B16F1/cystatin화B16F1/pcDNA3.1세포총단백적쌍향전영도보상공유필배단백점(412±20)개,기중유11개단백적표체차이재2배이상,5개상조,6개하조.저11개단백화1개부재B16F1/cystatin중표체적단백경MALDI-TOF-MS분석,기중10개단백득도료감정,타문분속우대사매계、소G단백Ran조공분자、진핵번역인자、핵감산격매등.Western blot현시NM23화RhoGDI-beta적단백표체분별상조료(2.23±0.34)배화(1.57±0.11)배;실시정량PCR결과현시NM23、RhoGDI-beta、RANBP1적mRNA표체상조,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1표체하조;여단백질조학연구결과일치.기우Gene Ontology적분석제시sv-cystatin작용적파분자주요정위우세포외주、질막화세포핵,여전록、반광안산단백매활성、세포조망등과정유관.결론 sv-cystatin가능통과조공억암기인NM23、RhoGDI등단백질발휘기항종류작용.sv-cystatin적주요파분자가능시전록인자、분비단백화질막수체.
