眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2009年
3期
197-200
,共4页
Müller细胞%脂质体%转染%增强型绿色荧光蛋白基因
Müller細胞%脂質體%轉染%增彊型綠色熒光蛋白基因
Müller세포%지질체%전염%증강형록색형광단백기인
目的 研究脂质体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因对体外培养的鼠视网膜Müller细胞转染的有效性及安全性.方法 采用视网膜组织块法培养鼠视网膜Müller细胞,振荡法分离纯化细胞,并对其进行免疫细胞化学鉴定.用阳离子脂质体Lipofectamine 2000负载pEGFP-N1质粒转染Müller细胞,荧光显微镜检测转染后12、24、48、72 h的转染效率.台盼蓝排斥实验检测转染和未转染细胞的活力,明确脂质体Lipofectamine 2000对Müller细胞的毒性作用.结果 成功培养视网膜Müller细胞,传代后90%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性.Lipofectamine 2000介导质粒pEGFP-N1转染Müller细胞后12、24、48、72 h的转染效率分别为(9.7±1.9)%、(18.1±16)%、(17.2±2.5)%、(16.9±1.7)%.台盼蓝排斥实验显示Lipofectamine 2000转染前后活细胞率分别为(98.2±5.6)%、(96.1±6.2)%.结论 脂质体Lipofectamine 2000可安全有效地介导Müller细胞的转染,为进一步明确Müller细胞的病理、生理功能及靶向Mller细胞的基因治疗提供了新的手段.
目的 研究脂質體介導增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因對體外培養的鼠視網膜Müller細胞轉染的有效性及安全性.方法 採用視網膜組織塊法培養鼠視網膜Müller細胞,振盪法分離純化細胞,併對其進行免疫細胞化學鑒定.用暘離子脂質體Lipofectamine 2000負載pEGFP-N1質粒轉染Müller細胞,熒光顯微鏡檢測轉染後12、24、48、72 h的轉染效率.檯盼藍排斥實驗檢測轉染和未轉染細胞的活力,明確脂質體Lipofectamine 2000對Müller細胞的毒性作用.結果 成功培養視網膜Müller細胞,傳代後90%以上的細胞呈神經膠質纖維痠性蛋白(GFAP)染色暘性.Lipofectamine 2000介導質粒pEGFP-N1轉染Müller細胞後12、24、48、72 h的轉染效率分彆為(9.7±1.9)%、(18.1±16)%、(17.2±2.5)%、(16.9±1.7)%.檯盼藍排斥實驗顯示Lipofectamine 2000轉染前後活細胞率分彆為(98.2±5.6)%、(96.1±6.2)%.結論 脂質體Lipofectamine 2000可安全有效地介導Müller細胞的轉染,為進一步明確Müller細胞的病理、生理功能及靶嚮Mller細胞的基因治療提供瞭新的手段.
목적 연구지질체개도증강형록색형광단백(EGFP)기인대체외배양적서시망막Müller세포전염적유효성급안전성.방법 채용시망막조직괴법배양서시망막Müller세포,진탕법분리순화세포,병대기진행면역세포화학감정.용양리자지질체Lipofectamine 2000부재pEGFP-N1질립전염Müller세포,형광현미경검측전염후12、24、48、72 h적전염효솔.태반람배척실험검측전염화미전염세포적활력,명학지질체Lipofectamine 2000대Müller세포적독성작용.결과 성공배양시망막Müller세포,전대후90%이상적세포정신경효질섬유산성단백(GFAP)염색양성.Lipofectamine 2000개도질립pEGFP-N1전염Müller세포후12、24、48、72 h적전염효솔분별위(9.7±1.9)%、(18.1±16)%、(17.2±2.5)%、(16.9±1.7)%.태반람배척실험현시Lipofectamine 2000전염전후활세포솔분별위(98.2±5.6)%、(96.1±6.2)%.결론 지질체Lipofectamine 2000가안전유효지개도Müller세포적전염,위진일보명학Müller세포적병리、생리공능급파향Mller세포적기인치료제공료신적수단.
