微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2003年
6期
34-38
,共5页
Azotobacter vinelandii,nifS敲除,固氮
Azotobacter vinelandii,nifS敲除,固氮
Azotobacter vinelandii,nifS고제,고담
从Azotobacter vinelandii中通过PCR扩增了5'和3'端分别缺失264bp和261bp的nifS'片段,克隆至载体pUC18,形成重组质粒pUCS,再通过同源重组的方法,将pUCS插入Azoto-bacter vinelandii的nifS中,形成nifS阻断突变体SU1,经Southern杂交和PCR扩增,证明所得确为nifS阻断突变株.SU1在外加氮源的BBGN培养基中能够快速生长,但在Burk's无氮培养基中,生长却极其缓慢,表明nifS基因的破坏,已造成SU1的固氮能力接近完全丧失.该突变体的成功构建,为进一步从中纯化固氮酶两组分,研究nifS对固氮酶结构及功能的影响及iscS与nifS之间的关系奠定了良好的基础.
從Azotobacter vinelandii中通過PCR擴增瞭5'和3'耑分彆缺失264bp和261bp的nifS'片段,剋隆至載體pUC18,形成重組質粒pUCS,再通過同源重組的方法,將pUCS插入Azoto-bacter vinelandii的nifS中,形成nifS阻斷突變體SU1,經Southern雜交和PCR擴增,證明所得確為nifS阻斷突變株.SU1在外加氮源的BBGN培養基中能夠快速生長,但在Burk's無氮培養基中,生長卻極其緩慢,錶明nifS基因的破壞,已造成SU1的固氮能力接近完全喪失.該突變體的成功構建,為進一步從中純化固氮酶兩組分,研究nifS對固氮酶結構及功能的影響及iscS與nifS之間的關繫奠定瞭良好的基礎.
종Azotobacter vinelandii중통과PCR확증료5'화3'단분별결실264bp화261bp적nifS'편단,극륭지재체pUC18,형성중조질립pUCS,재통과동원중조적방법,장pUCS삽입Azoto-bacter vinelandii적nifS중,형성nifS조단돌변체SU1,경Southern잡교화PCR확증,증명소득학위nifS조단돌변주.SU1재외가담원적BBGN배양기중능구쾌속생장,단재Burk's무담배양기중,생장각겁기완만,표명nifS기인적파배,이조성SU1적고담능력접근완전상실.해돌변체적성공구건,위진일보종중순화고담매량조분,연구nifS대고담매결구급공능적영향급iscS여nifS지간적관계전정료량호적기출.
