CAJ | 학술논문

目的:利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3单链抗体(scFv).方法:从分泌抗人整合素ανβ3单抗(mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中,用RT-PCR扩增VH和VL基因,对其核苷酸序列分析后,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,组装成scFv基因,并克隆至原核表达载体pTIG-TRX中.以重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导目的基因表达.结果:转化菌可表达相对分子质量(Mr)为31 000的scFv.Western blot证实,具有His6标签蛋白的表达.经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养,scFv获得了可溶性形式表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析纯化后纯度达91%以上.ELISA鉴定证实,scFv具有良好的抗原结合活性.结论:成功地构建并表达抗人整合素ανβ3的scFv,为进一步临床研究奠定了基础.
목적:이용기인공정항체기술구건항인정합소ανβ3단련항체(scFv).방법:종분비항인정합소ανβ3단항(mAb)적잡교류세포E10총RNA중,용RT-PCR확증VH화VL기인,대기핵감산서렬분석후,통과PCR재VH화VL기인간삽입유성련접자(Gly4Ser)3,조장성scFv기인,병극륭지원핵표체재체pTIG-TRX중.이중조자전화대장간균BL21(DE3)유도목적기인표체.결과:전화균가표체상대분자질량(Mr)위31 000적scFv.Western blot증실,구유His6표첨단백적표체.경저제량적IPTG유도화교저온도배양,scFv획득료가용성형식표체.표체산물경Ni-NTA경지당층석순화후순도체91%이상.ELISA감정증실,scFv구유량호적항원결합활성.결론:성공지구건병표체항인정합소ανβ3적scFv,위진일보림상연구전정료기출.