中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2006年
6期
589-593
,共5页
李伟灿%孟小林%徐进平%王健%鲁伟%徐智圣
李偉燦%孟小林%徐進平%王健%魯偉%徐智聖
리위찬%맹소림%서진평%왕건%로위%서지골
抗菌肽%活性表达%抗BmNPV感染
抗菌肽%活性錶達%抗BmNPV感染
항균태%활성표체%항BmNPV감염
通过大肠杆菌JM109诱导家蚕,提取其脂肪体总mRNA后,通过RT-PCR 得到 cDNA,根据GenBank上家蚕抗菌肽 Cecropin D 的cDNA序列,设计并合成引物,然后PCR扩增得到 Cecropin D肽基因并克隆到pGEM-T载体中,经过EcoRΙ和 Xho I 酶切,连接并将Cecropin D肽基因插入pET32a表达载体中.用重组质粒pET32a- ecropin D 转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-Cecropin D 以可溶形式得到高效表达,经SDS-PAGE检测显示分子量为23kDa与预期大小相符,表达量约为总蛋白的30%.融合蛋白经Ni2+ 柱纯化后通过肠激酶切割后释放为 Trx(18kDa)和 Cecropin D (5kDa),最后通过超滤管分离得到重组抗菌肽.通过抑菌实验测得重组CecropinD对于革兰氏阴性及阳性菌均有抑菌活性.并将重组Cecropin D 与家蚕病毒BmNPV作用混合4h后,一起投喂家蚕,发现病毒感染力有明显降低,说明其有抗病毒感染作用.
通過大腸桿菌JM109誘導傢蠶,提取其脂肪體總mRNA後,通過RT-PCR 得到 cDNA,根據GenBank上傢蠶抗菌肽 Cecropin D 的cDNA序列,設計併閤成引物,然後PCR擴增得到 Cecropin D肽基因併剋隆到pGEM-T載體中,經過EcoRΙ和 Xho I 酶切,連接併將Cecropin D肽基因插入pET32a錶達載體中.用重組質粒pET32a- ecropin D 轉化大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG誘導下,融閤蛋白Trx-Cecropin D 以可溶形式得到高效錶達,經SDS-PAGE檢測顯示分子量為23kDa與預期大小相符,錶達量約為總蛋白的30%.融閤蛋白經Ni2+ 柱純化後通過腸激酶切割後釋放為 Trx(18kDa)和 Cecropin D (5kDa),最後通過超濾管分離得到重組抗菌肽.通過抑菌實驗測得重組CecropinD對于革蘭氏陰性及暘性菌均有抑菌活性.併將重組Cecropin D 與傢蠶病毒BmNPV作用混閤4h後,一起投餵傢蠶,髮現病毒感染力有明顯降低,說明其有抗病毒感染作用.
통과대장간균JM109유도가잠,제취기지방체총mRNA후,통과RT-PCR 득도 cDNA,근거GenBank상가잠항균태 Cecropin D 적cDNA서렬,설계병합성인물,연후PCR확증득도 Cecropin D태기인병극륭도pGEM-T재체중,경과EcoRΙ화 Xho I 매절,련접병장Cecropin D태기인삽입pET32a표체재체중.용중조질립pET32a- ecropin D 전화대장간균BL21(DE3),재IPTG유도하,융합단백Trx-Cecropin D 이가용형식득도고효표체,경SDS-PAGE검측현시분자량위23kDa여예기대소상부,표체량약위총단백적30%.융합단백경Ni2+ 주순화후통과장격매절할후석방위 Trx(18kDa)화 Cecropin D (5kDa),최후통과초려관분리득도중조항균태.통과억균실험측득중조CecropinD대우혁란씨음성급양성균균유억균활성.병장중조Cecropin D 여가잠병독BmNPV작용혼합4h후,일기투위가잠,발현병독감염력유명현강저,설명기유항병독감염작용.
