CAJ | 학술논문

胰岛素刺激骨胳肌产生磷脂酰肌醇3,4,5三磷酸(PI(3,4,5)P3),它是促进葡萄糖转运子4(GLUT4)与细胞膜融合的必要条件.向肌肉细胞内导入PI(3,4,5)P3可以模拟胰岛素刺激GLUT4与细胞膜融合的作用,但不足以增加细胞摄取葡萄糖的量.本研究目的是探讨PI(3,4,5)P3与胰岛素作用不同的机制.在骨骼肌细胞株(L6-GLUT4myc)中,应用免疫反应方法检测细胞膜片上与特异性抗体反应的GLUT4的胞浆区羧基末端表位和胞外区myc表位的可用性;使用不能渗透到细胞内的甘露糖-生物素衍生物Bio-LC-ATB-BMPA,结合亲和光化学标记法检测GLUT4胞外区的活性位点.相对于基础组,100 nmol/L胰岛素和10 μmol/L PI(3,4,5)P3分别使与myc结合的抗体量增加1.64倍和1.58倍.胰岛素还使细胞膜上GLUT4的光化学标记量和细胞膜片上与羧基末端表位结合的抗体量分别增加了2.47倍和2.04倍,而PI(3,4,5)P3则无此作用.在胰岛素作用下,细胞膜片上与羧基末端表位结合的抗体量大于与myc表位结合的抗体量(分别为2.04和1.64倍).结果表明:(i)尽管PI(3,4,5)P3能使GLUT4与细胞膜融合,但不能使GLUT4胞外区的活性位点暴露;(ii)GLUT4胞外区活性位点的可用性与胞浆区羧基末端的可用性相关;(iii)除了能刺激GLUT4与细胞膜融合,胰岛素还使封闭GLUT4羧基末端的蛋白脱离.推论胞浆内某种蛋白封闭羧基末端,同样阻止甘露糖-生物素衍生物对GLUT4活性位点的标记,并可能妨碍GLUT4转运葡萄糖.
이도소자격골각기산생린지선기순3,4,5삼린산(PI(3,4,5)P3),타시촉진포도당전운자4(GLUT4)여세포막융합적필요조건.향기육세포내도입PI(3,4,5)P3가이모의이도소자격GLUT4여세포막융합적작용,단불족이증가세포섭취포도당적량.본연구목적시탐토PI(3,4,5)P3여이도소작용불동적궤제.재골격기세포주(L6-GLUT4myc)중,응용면역반응방법검측세포막편상여특이성항체반응적GLUT4적포장구최기말단표위화포외구myc표위적가용성;사용불능삼투도세포내적감로당-생물소연생물Bio-LC-ATB-BMPA,결합친화광화학표기법검측GLUT4포외구적활성위점.상대우기출조,100 nmol/L이도소화10 μmol/L PI(3,4,5)P3분별사여myc결합적항체량증가1.64배화1.58배.이도소환사세포막상GLUT4적광화학표기량화세포막편상여최기말단표위결합적항체량분별증가료2.47배화2.04배,이PI(3,4,5)P3칙무차작용.재이도소작용하,세포막편상여최기말단표위결합적항체량대우여myc표위결합적항체량(분별위2.04화1.64배).결과표명:(i)진관PI(3,4,5)P3능사GLUT4여세포막융합,단불능사GLUT4포외구적활성위점폭로;(ii)GLUT4포외구활성위점적가용성여포장구최기말단적가용성상관;(iii)제료능자격GLUT4여세포막융합,이도소환사봉폐GLUT4최기말단적단백탈리.추론포장내모충단백봉폐최기말단,동양조지감로당-생물소연생물대GLUT4활성위점적표기,병가능방애GLUT4전운포도당.