CAJ | 학술논문

根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97 %和95.6 %.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39 %,表达量约为1.08mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.
근거이발표적Bm86기인서렬,설계표체형인물,이용RT-PCR기술,종미소우비기아유비적연마물중확증Bm86기인,장PCR산물련입pGEM-T Easy재체,구건중조극륭재체pGEM-T easy-Bm86.측서분석표명:극륭적미소우비Bm86기인서렬여GenBank상등록적Bm86기인적핵감산화안기산서렬적동원성분별위97 %화95.6 %.연후대중조극륭재체pGEM-T easy-Bm86진행쌍매절,획득대유점성말단적Bm86기인편단,병장차편단정향아극륭입원핵표체재체pGEX-4T-1,구건중조원핵표체재체pGEX-4T-1-Bm86,장기전화도BL21숙주균중,용IPTG진행유도표체.SDS-PAGE검측표명표체산물위분자량위88Ku적융합단백,목적단백약점단백총량적39 %,표체량약위1.08mg/mL.Western blot분석표명차표체산물능피토항미소우비양성혈청소식별.