药学学报
藥學學報
약학학보
ACTA PHARMACEUTICA SINICA
2008年
11期
1157-1160
,共4页
王丽娜%孔建强%朱平%杜冠华%王伟%程克棣
王麗娜%孔建彊%硃平%杜冠華%王偉%程剋棣
왕려나%공건강%주평%두관화%왕위%정극체
SARS-CoV%未知功能小蛋白%X5%包涵体%透析%复性
SARS-CoV%未知功能小蛋白%X5%包涵體%透析%複性
SARS-CoV%미지공능소단백%X5%포함체%투석%복성
将SARS-CoV未知功能小蛋白X5的基因在大肠杆菌中进行诱导表达,获得以包涵体形式存在的重组X5蛋白.通过高浓度尿素变性溶解包涵体,亲和层析法纯化蛋白,然后对其进行尿素梯度透析复性,最终得到的蛋白纯度＞95%,终产率93.3 mg·L-1.SDS-PAGE电泳和LC-ESI-MS/MS结果表明,该重组蛋白大小与理论相符,序列与GenBank中注册的X5蛋白序列一致,说明该蛋白为目的蛋白.利用纯化的X5蛋白制备得到多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:72 900,说明纯化后的蛋白对兔有很强的免疫原性.X5多克隆抗体的成功制备,为将来鉴定X5蛋白的药理学活性奠定了基础.
將SARS-CoV未知功能小蛋白X5的基因在大腸桿菌中進行誘導錶達,穫得以包涵體形式存在的重組X5蛋白.通過高濃度尿素變性溶解包涵體,親和層析法純化蛋白,然後對其進行尿素梯度透析複性,最終得到的蛋白純度＞95%,終產率93.3 mg·L-1.SDS-PAGE電泳和LC-ESI-MS/MS結果錶明,該重組蛋白大小與理論相符,序列與GenBank中註冊的X5蛋白序列一緻,說明該蛋白為目的蛋白.利用純化的X5蛋白製備得到多剋隆抗體,ELISA檢測抗體效價為1:72 900,說明純化後的蛋白對兔有很彊的免疫原性.X5多剋隆抗體的成功製備,為將來鑒定X5蛋白的藥理學活性奠定瞭基礎.
장SARS-CoV미지공능소단백X5적기인재대장간균중진행유도표체,획득이포함체형식존재적중조X5단백.통과고농도뇨소변성용해포함체,친화층석법순화단백,연후대기진행뇨소제도투석복성,최종득도적단백순도＞95%,종산솔93.3 mg·L-1.SDS-PAGE전영화LC-ESI-MS/MS결과표명,해중조단백대소여이론상부,서렬여GenBank중주책적X5단백서렬일치,설명해단백위목적단백.이용순화적X5단백제비득도다극륭항체,ELISA검측항체효개위1:72 900,설명순화후적단백대토유흔강적면역원성.X5다극륭항체적성공제비,위장래감정X5단백적약이학활성전정료기출.
