CAJ | 학술논문

目的:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用,并研究移植辐射损伤模型SCID小鼠的效果.方法:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果,建立辐射损伤模型SCID小鼠,将扩增后的CD34+造血干/祖细胞经CFDA SE荧光标记后移植入SCID小鼠体内,通过RT-PCR和观察荧光标记细胞来检测小鼠内的人源细胞.结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的CD34+造血干/祖细胞纯度可达(95.6±2.58)%,与饲养层细胞共培养后CD34+造血干/祖细胞可扩增13.2倍,表面粘附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,移植入SCID小鼠四周后,仍可见带有荧光标记的人源细胞,RT-PCR证明人源基因Alu的存在.结论:建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且有较高的移植效率和造血活性.
목적:건립전hLIF기인선병독재체적사양층세포,관찰대CD34+조혈간/조세포적확증작용,병연구이식복사손상모형SCID소서적효과.방법:건립전hLIF기인선병독재체적사양층세포,병용RT-PCR법감정목적기인;채용면역자주법분리제대혈CD34+조혈간/조세포,류식세포술검측순도;장CD34+조혈간/조세포여사양층세포공배양,류식세포술검측각조증식효과,건립복사손상모형SCID소서,장확증후적CD34+조혈간/조세포경CFDA SE형광표기후이식입SCID소서체내,통과RT-PCR화관찰형광표기세포래검측소서내적인원세포.결과:건립적전기인사양층세포균유록색형광,RT-PCR법증실유목적기인표체,면역자주법분리적CD34+조혈간/조세포순도가체(95.6±2.58)%,여사양층세포공배양후CD34+조혈간/조세포가확증13.2배,표면점부분자CXCR4화CD54표체량잉교고,이식입SCID소서사주후,잉가견대유형광표기적인원세포,RT-PCR증명인원기인Alu적존재.결론:건립적전hLIF기인선병독재체사양층세포가이유효지확증CD34+조혈간/조세포,연완기분화,병차유교고적이식효솔화조혈활성.