中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
11期
858-861,886
,共5页
郭春和%焦茂兴%何俊%刘德辉%黄毓茂
郭春和%焦茂興%何俊%劉德輝%黃毓茂
곽춘화%초무흥%하준%류덕휘%황육무
抗菌肽Cecropin D%毕赤酵母%抗菌活性
抗菌肽Cecropin D%畢赤酵母%抗菌活性
항균태Cecropin D%필적효모%항균활성
为使抗菌肽Cecropin D在巴斯德毕赤酵母中高效表达,本研究根据Cecropin D全基因序列和毕赤酵母的偏嗜性设计合成4条寡聚西核苷酸,SOEing-PCR技术法合成Cecropin D基因序列,并克隆至酵母表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒,将其线性化后电击转化毕赤酵母菌株SMD1168,经高浓度博莱霉素筛选,获得高拷贝转化子,菌液PCR鉴定表明Cecropin D基因已整合到酵母基因组中.在GAP强启动子调控下,重组Cecropin D高效分泌表达,产物耐高温耐酸碱,并对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑菌效果,对E.coliDH5 α和S.aureus Cowan I株的MIC值分别为2.17 μg/mL和4.55 μg/mL.
為使抗菌肽Cecropin D在巴斯德畢赤酵母中高效錶達,本研究根據Cecropin D全基因序列和畢赤酵母的偏嗜性設計閤成4條寡聚西覈苷痠,SOEing-PCR技術法閤成Cecropin D基因序列,併剋隆至酵母錶達載體pGAPZαA中,構建重組錶達質粒,將其線性化後電擊轉化畢赤酵母菌株SMD1168,經高濃度博萊黴素篩選,穫得高拷貝轉化子,菌液PCR鑒定錶明Cecropin D基因已整閤到酵母基因組中.在GAP彊啟動子調控下,重組Cecropin D高效分泌錶達,產物耐高溫耐痠堿,併對部分革蘭氏暘性菌和革蘭氏陰性菌均有抑菌效果,對E.coliDH5 α和S.aureus Cowan I株的MIC值分彆為2.17 μg/mL和4.55 μg/mL.
위사항균태Cecropin D재파사덕필적효모중고효표체,본연구근거Cecropin D전기인서렬화필적효모적편기성설계합성4조과취서핵감산,SOEing-PCR기술법합성Cecropin D기인서렬,병극륭지효모표체재체pGAPZαA중,구건중조표체질립,장기선성화후전격전화필적효모균주SMD1168,경고농도박래매소사선,획득고고패전화자,균액PCR감정표명Cecropin D기인이정합도효모기인조중.재GAP강계동자조공하,중조Cecropin D고효분비표체,산물내고온내산감,병대부분혁란씨양성균화혁란씨음성균균유억균효과,대E.coliDH5 α화S.aureus Cowan I주적MIC치분별위2.17 μg/mL화4.55 μg/mL.
