生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2000年
3期
315-318
,共4页
谭文斌%聂怡玲%罗赛群%郭小珊%成光杰%陈汉春%朱定尔
譚文斌%聶怡玲%囉賽群%郭小珊%成光傑%陳漢春%硃定爾
담문빈%섭이령%라새군%곽소산%성광걸%진한춘%주정이
基因表达定量%定量RT-PCR%人干细胞因子基因
基因錶達定量%定量RT-PCR%人榦細胞因子基因
기인표체정량%정량RT-PCR%인간세포인자기인
一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术,构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技术,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA,并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理,以导致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic),经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明:该RNA-CRS与hSCF mRNA比较,缺失了从第499位至608位共110个核苷酸,但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物,反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准,适用于定量RT-PCR中,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.
一種適用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技術,構建人榦細胞因子(hSCF)基因的RNA競爭性參攷標準(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技術,從HepG2細胞中擴增齣全長人hSCF cDNA,併剋隆入質粒pGEM-T穫重組的pGEMSCF載體,經ExonucleaseⅢ和S1覈痠酶適噹處理,以導緻hSCF cDNA中一小片段缺失,由此穫得重組pGEMSCF模擬體(mimic),經體外轉錄得到hSCF RNA-CRS.測序錶明:該RNA-CRS與hSCF mRNA比較,缺失瞭從第499位至608位共110箇覈苷痠,但二者RT-PCR反應可用同一對擴增引物,反應動力學極為相似.這種hSCF RNA-CRS可作為一種較理想的競爭性參攷標準,適用于定量RT-PCR中,以對重組hSCF在真覈細胞中的錶達水平進行準確的定量分析.此方法亦可推廣應用于其他真覈基因的錶達水平及/或調控的檢測和研究.
일충괄용우정량RT-PCR、용ExonucleaseⅢ부분매절척제기술,구건인간세포인자(hSCF)기인적RNA경쟁성삼고표준(RNA-CRS)적신방법:용RT-PCR기술,종HepG2세포중확증출전장인hSCF cDNA,병극륭입질립pGEM-T획중조적pGEMSCF재체,경ExonucleaseⅢ화S1핵산매괄당처리,이도치hSCF cDNA중일소편단결실,유차획득중조pGEMSCF모의체(mimic),경체외전록득도hSCF RNA-CRS.측서표명:해RNA-CRS여hSCF mRNA비교,결실료종제499위지608위공110개핵감산,단이자RT-PCR반응가용동일대확증인물,반응동역학겁위상사.저충hSCF RNA-CRS가작위일충교이상적경쟁성삼고표준,괄용우정량RT-PCR중,이대중조hSCF재진핵세포중적표체수평진행준학적정량분석.차방법역가추엄응용우기타진핵기인적표체수평급/혹조공적검측화연구.
