CAJ | 학술논문

目的克隆弓形虫核仁G蛋白-1(NOG1)基因的全长cDNA序列.方法根据NCBI GeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5'-末端快速扩增法(5'-RACE)和cDNA 3'-末端快速扩增法(3'-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3'-端和5'-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性.结果 5'-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长1287 bp,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5'-RACE在5'端扩增获得未知序列为1 196 bp.3'-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为1 634 bp,去除引物和已知序列,经3'-RACE扩增获得的3'-端未知序列为1 204 bp.Blast全长为3 167 bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(650 bp-2 809 bp).推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa),在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的.该序列已登录NCBI GeneBank,核酸序列登录号AY686734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94290.结论本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析.
목적극륭궁형충핵인G단백-1(NOG1)기인적전장cDNA서렬.방법근거NCBI GeneBank중등록적궁형충NOG1기인적유일EST서렬설계인물,이용cDNA 5'-말단쾌속확증법(5'-RACE)화cDNA 3'-말단쾌속확증법(3'-RACE)분별대이지서렬진행연신,장확증획득적3'-단화5'-단미지서렬여위우중간위치적이지서렬진행병접,연후경Blast검험전장서렬적정학성.결과 5'-RACE확증획득3개불동장도적편단,최장편단전장1287 bp,거제인물화협잡적이지서렬후,통과5'-RACE재5'단확증획득미지서렬위1 196 bp.3'-RACE확증후득도일조특이성조대,위우대약1.7kb좌우,측서전장위1 634 bp,거제인물화이지서렬,경3'-RACE확증획득적3'-단미지서렬위1 204 bp.Blast전장위3 167 bp적3단병접서렬,발현기복개NOG1기인cDNA적완정ORF혹자CDS서렬(650 bp-2 809 bp).추도번역출적단백질일급결구포함719개안기산(aa),재소유이발현물충적NOG1중,궁형충NOG1기인적cDNA화상응적aa서렬도시최장적.해서렬이등록NCBI GeneBank,핵산서렬등록호AY686734,대응단백질적aa서렬등록호위AAT94290.결론본연구수차극륭획득료궁형충NOG1기인적전장cDNA서렬,병대상응적aa서렬진행료추도번역화간단분석.