分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2006年
3期
329-332
,共4页
王海燕%姜亚博%杨文香%刘大群%张汀
王海燕%薑亞博%楊文香%劉大群%張汀
왕해연%강아박%양문향%류대군%장정
小麦抗叶锈病基因%Lr35%TAIL-PCR%克隆
小麥抗葉鏽病基因%Lr35%TAIL-PCR%剋隆
소맥항협수병기인%Lr35%TAIL-PCR%극륭
利用小麦抗叶锈病近等基因系材料TcLr35,根据已扩增出的Lr35相关基因组DNA片段RGA1设计3对特异性引物,通过热不对称交错PCR技术获得2个有效扩增片段,将目的片段回收纯化,连接到pGEM-T Easy载体,转化Ecoli DH5α感受态细胞中,经EcoR Ⅰ酶切,验证插入片段,选择合适菌液测序.获得了2条侧翼序列,长度分别为511bp和614bp,与RGA1重叠区分别为293bp和509bp,分别向3'端和5'端延长了208bp和100bp,拼接后序列为915bp.经BLASTn同源性比较与小麦抗叶锈病基因Lr21同源性为93%(score值为674,E值为0.0),与含有Lr10基因的450Kb大片段重叠群同源性为90%(score值为260,E值为7e-66),该研究为克隆Lr35目的基因奠定了基础.
利用小麥抗葉鏽病近等基因繫材料TcLr35,根據已擴增齣的Lr35相關基因組DNA片段RGA1設計3對特異性引物,通過熱不對稱交錯PCR技術穫得2箇有效擴增片段,將目的片段迴收純化,連接到pGEM-T Easy載體,轉化Ecoli DH5α感受態細胞中,經EcoR Ⅰ酶切,驗證插入片段,選擇閤適菌液測序.穫得瞭2條側翼序列,長度分彆為511bp和614bp,與RGA1重疊區分彆為293bp和509bp,分彆嚮3'耑和5'耑延長瞭208bp和100bp,拼接後序列為915bp.經BLASTn同源性比較與小麥抗葉鏽病基因Lr21同源性為93%(score值為674,E值為0.0),與含有Lr10基因的450Kb大片段重疊群同源性為90%(score值為260,E值為7e-66),該研究為剋隆Lr35目的基因奠定瞭基礎.
이용소맥항협수병근등기인계재료TcLr35,근거이확증출적Lr35상관기인조DNA편단RGA1설계3대특이성인물,통과열불대칭교착PCR기술획득2개유효확증편단,장목적편단회수순화,련접도pGEM-T Easy재체,전화Ecoli DH5α감수태세포중,경EcoR Ⅰ매절,험증삽입편단,선택합괄균액측서.획득료2조측익서렬,장도분별위511bp화614bp,여RGA1중첩구분별위293bp화509bp,분별향3'단화5'단연장료208bp화100bp,병접후서렬위915bp.경BLASTn동원성비교여소맥항협수병기인Lr21동원성위93%(score치위674,E치위0.0),여함유Lr10기인적450Kb대편단중첩군동원성위90%(score치위260,E치위7e-66),해연구위극륭Lr35목적기인전정료기출.
