花生学报
花生學報
화생학보
PEANUT SCIENCE AND TECHNOLOGY
2007年
2期
1-5
,共5页
花生%种子%cDNA文库%SMART技术
花生%種子%cDNA文庫%SMART技術
화생%충자%cDNA문고%SMART기술
以花生品种闽花5号各发育时期的种子为材料分离mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA.利用限制性内切酶SfiⅠ酶切.将经过分级分离得到的cDNA连接到质粒载体pDNR-LIB,成功构建花生种子全长cDNA文库.将所得到初级文库扩增后进行保存,检测扩增文库滴度为1.7×109 cfu/mL.PCR鉴定重组子,发现重组率接近100%,插入片段集中分布在0.5～2.0 kb.插入片段的平均大小在1000 bp左右,这说明该文库既可以满足低丰度基因的筛选,也可保证获得全长cDNA.
以花生品種閩花5號各髮育時期的種子為材料分離mRNA,利用SMART技術閤成雙鏈cDNA.利用限製性內切酶SfiⅠ酶切.將經過分級分離得到的cDNA連接到質粒載體pDNR-LIB,成功構建花生種子全長cDNA文庫.將所得到初級文庫擴增後進行保存,檢測擴增文庫滴度為1.7×109 cfu/mL.PCR鑒定重組子,髮現重組率接近100%,插入片段集中分佈在0.5～2.0 kb.插入片段的平均大小在1000 bp左右,這說明該文庫既可以滿足低豐度基因的篩選,也可保證穫得全長cDNA.
이화생품충민화5호각발육시기적충자위재료분리mRNA,이용SMART기술합성쌍련cDNA.이용한제성내절매SfiⅠ매절.장경과분급분리득도적cDNA련접도질립재체pDNR-LIB,성공구건화생충자전장cDNA문고.장소득도초급문고확증후진행보존,검측확증문고적도위1.7×109 cfu/mL.PCR감정중조자,발현중조솔접근100%,삽입편단집중분포재0.5～2.0 kb.삽입편단적평균대소재1000 bp좌우,저설명해문고기가이만족저봉도기인적사선,야가보증획득전장cDNA.
