中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
10期
1805-1807
,共3页
干细胞%转化生长因子%软骨细胞%细胞分化%脂肪组织/细胞学
榦細胞%轉化生長因子%軟骨細胞%細胞分化%脂肪組織/細胞學
간세포%전화생장인자%연골세포%세포분화%지방조직/세포학
目的:应用转化生长因子β1,体外诱导脂肪干细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性.方法:实验于2005-04/2006-06在华中科技大学同济医学院公卫实验室完成.①取大鼠腹股沟处脂肪,酶消化法分离、培养脂肪干细胞,体外传代培养.②取第3代细胞通过转化生长因子β1、地塞米松和维生素C诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化.③诱导后14 d观察细胞形态变化,进行阿辛蓝染色检测软骨基质的分泌、免疫组织化学检测细胞Ⅱ型胶原的表达,采用Western-blot和反转录-聚合酶链反应检测诱导前后成软骨相关的Sox9,蛋白聚糖与Ⅱ型胶原的表达.结果:①细胞接种的最初几日,细胞呈圆形,1周后贴壁细胞呈长梭形,体积增大;14 d后贴壁生长细胞基本长满单层,中心细胞排列紧密,形态与骨髓间充质干细胞相似.诱导培养后,细胞形态逐渐由梭型向多角形、多边形转变.诱导14 d后多数细胞呈平坦的多边角形状细胞;其夹杂多角突起状或多角纺锤状细胞.②诱导后阿辛蓝染色示糖胺聚糖均匀分布于基质中.③免疫组织化学染色示基质中Ⅱ型胶原表达阳性.④反转录-聚合酶链反应检测成软骨相关的Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达阳性.⑤Western-blot印迹检测细胞诱导后Ⅱ型胶原蛋白表达阳性.结论:脂肪干细胞在特定培养液的诱导下可向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有望成为软骨组织工程新的细胞来源.
目的:應用轉化生長因子β1,體外誘導脂肪榦細胞嚮成軟骨細胞錶型分化,探討其作為組織工程化軟骨種子細胞的可行性.方法:實驗于2005-04/2006-06在華中科技大學同濟醫學院公衛實驗室完成.①取大鼠腹股溝處脂肪,酶消化法分離、培養脂肪榦細胞,體外傳代培養.②取第3代細胞通過轉化生長因子β1、地塞米鬆和維生素C誘導脂肪榦細胞嚮軟骨細胞分化.③誘導後14 d觀察細胞形態變化,進行阿辛藍染色檢測軟骨基質的分泌、免疫組織化學檢測細胞Ⅱ型膠原的錶達,採用Western-blot和反轉錄-聚閤酶鏈反應檢測誘導前後成軟骨相關的Sox9,蛋白聚糖與Ⅱ型膠原的錶達.結果:①細胞接種的最初幾日,細胞呈圓形,1週後貼壁細胞呈長梭形,體積增大;14 d後貼壁生長細胞基本長滿單層,中心細胞排列緊密,形態與骨髓間充質榦細胞相似.誘導培養後,細胞形態逐漸由梭型嚮多角形、多邊形轉變.誘導14 d後多數細胞呈平坦的多邊角形狀細胞;其夾雜多角突起狀或多角紡錘狀細胞.②誘導後阿辛藍染色示糖胺聚糖均勻分佈于基質中.③免疫組織化學染色示基質中Ⅱ型膠原錶達暘性.④反轉錄-聚閤酶鏈反應檢測成軟骨相關的Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型膠原mRNA錶達暘性.⑤Western-blot印跡檢測細胞誘導後Ⅱ型膠原蛋白錶達暘性.結論:脂肪榦細胞在特定培養液的誘導下可嚮成軟骨細胞錶型分化,併能分泌軟骨細胞特異性基質,有望成為軟骨組織工程新的細胞來源.
목적:응용전화생장인자β1,체외유도지방간세포향성연골세포표형분화,탐토기작위조직공정화연골충자세포적가행성.방법:실험우2005-04/2006-06재화중과기대학동제의학원공위실험실완성.①취대서복고구처지방,매소화법분리、배양지방간세포,체외전대배양.②취제3대세포통과전화생장인자β1、지새미송화유생소C유도지방간세포향연골세포분화.③유도후14 d관찰세포형태변화,진행아신람염색검측연골기질적분비、면역조직화학검측세포Ⅱ형효원적표체,채용Western-blot화반전록-취합매련반응검측유도전후성연골상관적Sox9,단백취당여Ⅱ형효원적표체.결과:①세포접충적최초궤일,세포정원형,1주후첩벽세포정장사형,체적증대;14 d후첩벽생장세포기본장만단층,중심세포배렬긴밀,형태여골수간충질간세포상사.유도배양후,세포형태축점유사형향다각형、다변형전변.유도14 d후다수세포정평탄적다변각형상세포;기협잡다각돌기상혹다각방추상세포.②유도후아신람염색시당알취당균균분포우기질중.③면역조직화학염색시기질중Ⅱ형효원표체양성.④반전록-취합매련반응검측성연골상관적Sox9、단백취당、Ⅱ형효원mRNA표체양성.⑤Western-blot인적검측세포유도후Ⅱ형효원단백표체양성.결론:지방간세포재특정배양액적유도하가향성연골세포표형분화,병능분비연골세포특이성기질,유망성위연골조직공정신적세포래원.
