人干燥综合征B抗原重组体的构建及融合表达
인간조종합정B항원중조체적구건급융합표체
Construction and Fusion Expression of Recombinant Human sjogren's Syndrome Antigen B
  • 万方数据
    医学分子生物学杂志 의학분자생물학잡지
    FOREIGN MEDICAL SCIENCES
    2008年 2期 133-136 ,共4页

    李倩%高扬%倪安平%于孟学%朱立平%刘音%李永哲%林嘉友%甘晓丹

    리천%고양%예안평%우맹학%주립평%류음%리영철%림가우%감효단

    人干燥综合征B抗原%cDNA克隆%重组体%融合表达 人榦燥綜閤徵B抗原%cDNA剋隆%重組體%融閤錶達
    인간조종합정B항원%cDNA극륭%중조체%융합표체
    目的 克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren's syndrome antigen B, SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础.方法 根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5'非编码区和3'非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,逆转录RT-PCR扩增人干燥综合征B抗原cDNA.PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠埃希菌DH5a,构建重组质粒PET-30a-SSB.对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序.重组质粒导入大肠埃希菌BL21,阳性克隆经鉴定后在IPTG诱导下表达.结果 RT-PCR扩增产物为1245bp.重组质粒PET-30a-SSB经EcoR I和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段.序列分析提示与GenBank中检索到的一致.SDS-PAGE和Western印迹结果显示融合蛋白相对分子量为73ku,具有天然SSB抗原活性.结论 成功克隆SSB基因并表达融合蛋白.
    목적 극륭인간조종합정B항원기인(human sjogren's syndrome antigen B, SSB)병진행원핵표체,위사용중조항원용우자신항체적림상검측전정기출.방법 근거GenBank중검색도적인SSB cDNA서렬,재5'비편마구화3'비편마구설계특이성인물,제취인원HeLa세포총RNA작위모판,역전록RT-PCR확증인간조종합정B항원cDNA.PCR산물순화후련접지재체PET-30a,도입대장애희균DH5a,구건중조질립PET-30a-SSB.대중조질립진행매절감정,선택양성극륭측서.중조질립도입대장애희균BL21,양성극륭경감정후재IPTG유도하표체.결과 RT-PCR확증산물위1245bp.중조질립PET-30a-SSB경EcoR I화HindⅢ쌍매절증실함목적기인편단.서렬분석제시여GenBank중검색도적일치.SDS-PAGE화Western인적결과현시융합단백상대분자량위73ku,구유천연SSB항원활성.결론 성공극륭SSB기인병표체융합단백.
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