农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
2期
246-253
,共8页
刘缙%王亚红%王强%刘曾甄%郭蔼光
劉縉%王亞紅%王彊%劉曾甄%郭藹光
류진%왕아홍%왕강%류증견%곽애광
银杏%抗菌蛋白%克隆%原核表达
銀杏%抗菌蛋白%剋隆%原覈錶達
은행%항균단백%극륭%원핵표체
通过40%及80%(NH4)2>SO4>分级盐析,CM Sephorose F.F.离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析;从银杏(Ginkgo biloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12 KD的抗菌蛋白.经过MALDI-TOF-MSPMF鉴定表明,该蛋白与一种新型抗菌蛋白Gnk2(ginkbilobin-2)具较高匹配率(P<0.05);根据ESI-MS/MS内肽氨基酸测序结果设计简并引物,扩增该蛋白基因一段,经比对发现与Gnk2基因序列相似性也达99%.按照Gnk2基因序列设计同源引物,利用RT-PCR克隆该抗菌蛋白全长基因,提交GeneBank(Accession No.FJ865399),并以此构建原核表达载体pGEX-GK2-1转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot分析表明,融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达.
通過40%及80%(NH4)2>SO4>分級鹽析,CM Sephorose F.F.離子交換層析和Superdex 75凝膠過濾層析;從銀杏(Ginkgo biloba)種仁中分離純化到一種錶觀分子量約為12 KD的抗菌蛋白.經過MALDI-TOF-MSPMF鑒定錶明,該蛋白與一種新型抗菌蛋白Gnk2(ginkbilobin-2)具較高匹配率(P<0.05);根據ESI-MS/MS內肽氨基痠測序結果設計簡併引物,擴增該蛋白基因一段,經比對髮現與Gnk2基因序列相似性也達99%.按照Gnk2基因序列設計同源引物,利用RT-PCR剋隆該抗菌蛋白全長基因,提交GeneBank(Accession No.FJ865399),併以此構建原覈錶達載體pGEX-GK2-1轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot分析錶明,融閤蛋白在大腸桿菌中能夠高效錶達.
통과40%급80%(NH4)2>SO4>분급염석,CM Sephorose F.F.리자교환층석화Superdex 75응효과려층석;종은행(Ginkgo biloba)충인중분리순화도일충표관분자량약위12 KD적항균단백.경과MALDI-TOF-MSPMF감정표명,해단백여일충신형항균단백Gnk2(ginkbilobin-2)구교고필배솔(P<0.05);근거ESI-MS/MS내태안기산측서결과설계간병인물,확증해단백기인일단,경비대발현여Gnk2기인서렬상사성야체99%.안조Gnk2기인서렬설계동원인물,이용RT-PCR극륭해항균단백전장기인,제교GeneBank(Accession No.FJ865399),병이차구건원핵표체재체pGEX-GK2-1전화대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE화Western blot분석표명,융합단백재대장간균중능구고효표체.
