生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2010年
6期
65-68
,共4页
张玲%范清林%王参军%邹文艺%宋礼华
張玲%範清林%王參軍%鄒文藝%宋禮華
장령%범청림%왕삼군%추문예%송례화
人肿瘤坏死因子受体Ⅱ%TNFRⅡ-Fc%真核表达%类风湿关节炎
人腫瘤壞死因子受體Ⅱ%TNFRⅡ-Fc%真覈錶達%類風濕關節炎
인종류배사인자수체Ⅱ%TNFRⅡ-Fc%진핵표체%류풍습관절염
构建人肿瘤坏死因子受体Ⅱ胞外区(TNFRⅡ)和人免疫球蛋白(IgG1)Fc段的融合基因真核表达栽体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达融合蛋白hTNFRⅡ-Fc.用全合成重叠延伸PCR方法克隆TNFRⅡ胞外区的基因 片段,再与(IgG1)Fc段拼接起来形成hTNFRⅡ-Fc融合基因,经HindⅢ,EcoRI 双酶切后插入至pEE14中构建pEE14-TNFRⅡ-Fc真核表达载体,脂质体转染至CHO细胞中进行表达及鉴定.ELISA检测到转染hTNFRⅡ-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hTNFRⅡ-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western-blot鉴定证实其为hTNFRⅡ-Fc蛋白,为进一步研究该融合蛋白在CHO细胞稳定表达及应用于类风湿关节炎等自身免疫性疾病临床治疗奠定了一定的研究基础.
構建人腫瘤壞死因子受體Ⅱ胞外區(TNFRⅡ)和人免疫毬蛋白(IgG1)Fc段的融閤基因真覈錶達栽體,併在中國倉鼠卵巢細胞(CHO)中錶達融閤蛋白hTNFRⅡ-Fc.用全閤成重疊延伸PCR方法剋隆TNFRⅡ胞外區的基因 片段,再與(IgG1)Fc段拼接起來形成hTNFRⅡ-Fc融閤基因,經HindⅢ,EcoRI 雙酶切後插入至pEE14中構建pEE14-TNFRⅡ-Fc真覈錶達載體,脂質體轉染至CHO細胞中進行錶達及鑒定.ELISA檢測到轉染hTNFRⅡ-Fc基因的CHO細胞培養上清中含有hTNFRⅡ-Fc蛋白,SDS-PAGE與Western-blot鑒定證實其為hTNFRⅡ-Fc蛋白,為進一步研究該融閤蛋白在CHO細胞穩定錶達及應用于類風濕關節炎等自身免疫性疾病臨床治療奠定瞭一定的研究基礎.
구건인종류배사인자수체Ⅱ포외구(TNFRⅡ)화인면역구단백(IgG1)Fc단적융합기인진핵표체재체,병재중국창서란소세포(CHO)중표체융합단백hTNFRⅡ-Fc.용전합성중첩연신PCR방법극륭TNFRⅡ포외구적기인 편단,재여(IgG1)Fc단병접기래형성hTNFRⅡ-Fc융합기인,경HindⅢ,EcoRI 쌍매절후삽입지pEE14중구건pEE14-TNFRⅡ-Fc진핵표체재체,지질체전염지CHO세포중진행표체급감정.ELISA검측도전염hTNFRⅡ-Fc기인적CHO세포배양상청중함유hTNFRⅡ-Fc단백,SDS-PAGE여Western-blot감정증실기위hTNFRⅡ-Fc단백,위진일보연구해융합단백재CHO세포은정표체급응용우류풍습관절염등자신면역성질병림상치료전정료일정적연구기출.
