潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2010年
5期
324-327
,共4页
唐媛媛%鞠吉雨%朱平%王丽娜%林志娟%邸大琳%苗乃法
唐媛媛%鞠吉雨%硃平%王麗娜%林誌娟%邸大琳%苗迺法
당원원%국길우%주평%왕려나%림지연%저대림%묘내법
mIL-35%载体构建%原核表达
mIL-35%載體構建%原覈錶達
mIL-35%재체구건%원핵표체
目的 克隆小鼠mIL-35两亚基mEBI3,mIL-12p35 cDNA,并构建mIL-35基因的原核表达载体并进行诱导表达.方法 RT-PCR方法从RAW246.7细胞中扩增mEBI3基因及脂多糖体外刺激BALB/c小鼠的脾细胞中扩增mIL-12p35基因,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mIL-12p35基因,并构建原核表达载体pET-30a-mIL-35,转化感受态E.coli BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的蛋白的表达.结果 成功克隆了mEBI3、mIL-12p35 cDNA,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mIL-12p35片段,并构建出原核表达载体pET-30a-mIL-35;在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为50 000的重组mIL-35蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中.结论 利用构建的原核表达载体pET-30a-mIL-35成功表达出mIL-35蛋白,为进一步探讨mIL-35的生物学功能奠定了基础.
目的 剋隆小鼠mIL-35兩亞基mEBI3,mIL-12p35 cDNA,併構建mIL-35基因的原覈錶達載體併進行誘導錶達.方法 RT-PCR方法從RAW246.7細胞中擴增mEBI3基因及脂多糖體外刺激BALB/c小鼠的脾細胞中擴增mIL-12p35基因,通過重疊PCR方法擴增齣mEBI3-Linker-mIL-12p35基因,併構建原覈錶達載體pET-30a-mIL-35,轉化感受態E.coli BL21(DE3),併用IPTG進行誘導錶達.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳方法檢測目的蛋白的錶達.結果 成功剋隆瞭mEBI3、mIL-12p35 cDNA,通過重疊PCR方法擴增齣mEBI3-Linker-mIL-12p35片段,併構建齣原覈錶達載體pET-30a-mIL-35;在IPTG誘導下在E.coli BL21(DE3)中高效錶達相對分子質量(Mr)為50 000的重組mIL-35蛋白,目的蛋白主要以包涵體的形式存在于沉澱中.結論 利用構建的原覈錶達載體pET-30a-mIL-35成功錶達齣mIL-35蛋白,為進一步探討mIL-35的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 극륭소서mIL-35량아기mEBI3,mIL-12p35 cDNA,병구건mIL-35기인적원핵표체재체병진행유도표체.방법 RT-PCR방법종RAW246.7세포중확증mEBI3기인급지다당체외자격BALB/c소서적비세포중확증mIL-12p35기인,통과중첩PCR방법확증출mEBI3-Linker-mIL-12p35기인,병구건원핵표체재체pET-30a-mIL-35,전화감수태E.coli BL21(DE3),병용IPTG진행유도표체.SDS-취병희선알응효전영방법검측목적단백적표체.결과 성공극륭료mEBI3、mIL-12p35 cDNA,통과중첩PCR방법확증출mEBI3-Linker-mIL-12p35편단,병구건출원핵표체재체pET-30a-mIL-35;재IPTG유도하재E.coli BL21(DE3)중고효표체상대분자질량(Mr)위50 000적중조mIL-35단백,목적단백주요이포함체적형식존재우침정중.결론 이용구건적원핵표체재체pET-30a-mIL-35성공표체출mIL-35단백,위진일보탐토mIL-35적생물학공능전정료기출.
