中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
12期
1118-1122
,共5页
段博芳%张利仙%段纲%董俊%叶玲玲%周晓黎%徐志斌%艾军
段博芳%張利仙%段綱%董俊%葉玲玲%週曉黎%徐誌斌%艾軍
단박방%장리선%단강%동준%협령령%주효려%서지빈%애군
H1N1%NP基因%杆状病毒表达载体%昆虫细胞
H1N1%NP基因%桿狀病毒錶達載體%昆蟲細胞
H1N1%NP기인%간상병독표체재체%곤충세포
目的 获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质.方法 根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP.该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-NP.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.结果 通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD.结论 实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达.
目的 穫得研髮A型豬流感病毒ELISA檢測試劑盒和製備NP蛋白單剋隆抗體的抗原物質.方法 根據已報道的豬流感病毒H1N1亞型NP基因序列(GenBank登錄號:GQ422386)人工閤成NP基因,通過XbaⅠ和EcoRⅠ特異性酶切,將NP基因剋隆于昆蟲桿狀病毒錶達載體pFastBacHTB,經PCR、酶切、測序鑒定後,穫得攜帶NP基因的重組質粒pFastBacHTB-NP.該重組質粒轉化含有桿狀病毒穿梭載體的DH10Bac感受態細胞,經抗生素、PCR篩選,穫得轉座的桿粒Bacmid-NP.在脂質體介導下轉染sf9昆蟲細胞,穫得重組桿狀病毒,再感染細胞,收穫目的蛋白.結果 通過SDS-PAGE和Western blotting分析錶明該蛋白得到錶達,且具有良好的生物活性,大小約為57KD.結論 實驗結果錶明已成功構建瞭攜帶NP基因的重組質粒pFastBacHTB-NP和轉座的桿粒Bacmid-NP,轉染後在sf9昆蟲細胞上成功的錶達.
목적 획득연발A형저류감병독ELISA검측시제합화제비NP단백단극륭항체적항원물질.방법 근거이보도적저류감병독H1N1아형NP기인서렬(GenBank등록호:GQ422386)인공합성NP기인,통과XbaⅠ화EcoRⅠ특이성매절,장NP기인극륭우곤충간상병독표체재체pFastBacHTB,경PCR、매절、측서감정후,획득휴대NP기인적중조질립pFastBacHTB-NP.해중조질립전화함유간상병독천사재체적DH10Bac감수태세포,경항생소、PCR사선,획득전좌적간립Bacmid-NP.재지질체개도하전염sf9곤충세포,획득중조간상병독,재감염세포,수획목적단백.결과 통과SDS-PAGE화Western blotting분석표명해단백득도표체,차구유량호적생물활성,대소약위57KD.결론 실험결과표명이성공구건료휴대NP기인적중조질립pFastBacHTB-NP화전좌적간립Bacmid-NP,전염후재sf9곤충세포상성공적표체.
