山西医药杂志
山西醫藥雜誌
산서의약잡지
SHANXI MEDICAL JOURNAL
2012年
3期
211-212,封3
,共3页
林哲绚%罗红军%李慧%张源%罗文鸿
林哲絢%囉紅軍%李慧%張源%囉文鴻
림철현%라홍군%리혜%장원%라문홍
免疫荧光测定%小鼠%巨噬细胞
免疫熒光測定%小鼠%巨噬細胞
면역형광측정%소서%거서세포
目的 观察免疫荧光技术中不同固定剂以及Triton X-100不同渗透时间对小鼠腹腔巨噬细胞p65蛋白核移位的影响,找出最适合观察p65蛋白移位的固定方法及Triton X-100渗透时间.方法 采用免疫荧光的方法观察使用不同固定剂(甲醇,1％～4％甲醛)固定,0.1％ Triton X-100渗透3～15 min的条件下,观察脂多糖刺激2h后,p65蛋白细胞内定位的情况.结果 p65蛋白在对照细胞主要定位于细胞质,脂多糖(LPS)刺激后p65蛋白移入胞核.甲醇固定后细胞荧光染色显色很弱且核区不明显,染色弥散；1％、2％甲醛固定不良可引起细胞收缩；4％甲醛固定后,核区与胞质p65蛋白荧光染色对比明显.0.1％Triton X-100作用3～5 min效果最佳,而作用10～15 min对照细胞核内也有较强荧光.结论 本实验表明,在免疫荧光技术中采用4％甲醛固定20 min,0.1％Triton X-100渗透3～5 min可更好的观察LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞p65核移位.
目的 觀察免疫熒光技術中不同固定劑以及Triton X-100不同滲透時間對小鼠腹腔巨噬細胞p65蛋白覈移位的影響,找齣最適閤觀察p65蛋白移位的固定方法及Triton X-100滲透時間.方法 採用免疫熒光的方法觀察使用不同固定劑(甲醇,1％～4％甲醛)固定,0.1％ Triton X-100滲透3～15 min的條件下,觀察脂多糖刺激2h後,p65蛋白細胞內定位的情況.結果 p65蛋白在對照細胞主要定位于細胞質,脂多糖(LPS)刺激後p65蛋白移入胞覈.甲醇固定後細胞熒光染色顯色很弱且覈區不明顯,染色瀰散；1％、2％甲醛固定不良可引起細胞收縮；4％甲醛固定後,覈區與胞質p65蛋白熒光染色對比明顯.0.1％Triton X-100作用3～5 min效果最佳,而作用10～15 min對照細胞覈內也有較彊熒光.結論 本實驗錶明,在免疫熒光技術中採用4％甲醛固定20 min,0.1％Triton X-100滲透3～5 min可更好的觀察LPS誘導的小鼠腹腔巨噬細胞p65覈移位.
목적 관찰면역형광기술중불동고정제이급Triton X-100불동삼투시간대소서복강거서세포p65단백핵이위적영향,조출최괄합관찰p65단백이위적고정방법급Triton X-100삼투시간.방법 채용면역형광적방법관찰사용불동고정제(갑순,1％～4％갑철)고정,0.1％ Triton X-100삼투3～15 min적조건하,관찰지다당자격2h후,p65단백세포내정위적정황.결과 p65단백재대조세포주요정위우세포질,지다당(LPS)자격후p65단백이입포핵.갑순고정후세포형광염색현색흔약차핵구불명현,염색미산；1％、2％갑철고정불량가인기세포수축；4％갑철고정후,핵구여포질p65단백형광염색대비명현.0.1％Triton X-100작용3～5 min효과최가,이작용10～15 min대조세포핵내야유교강형광.결론 본실험표명,재면역형광기술중채용4％갑철고정20 min,0.1％Triton X-100삼투3～5 min가경호적관찰LPS유도적소서복강거서세포p65핵이위.
