西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
6期
671-675
,共5页
樊万虎%成军%刘小静%张树林%王琦
樊萬虎%成軍%劉小靜%張樹林%王琦
번만호%성군%류소정%장수림%왕기
XBP1基因%HepG2细胞%抑制性消减杂交技术%反式调节
XBP1基因%HepG2細胞%抑製性消減雜交技術%反式調節
XBP1기인%HepG2세포%억제성소감잡교기술%반식조절
目的 应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因.方法 以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照；制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析.结果 成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA.扩增后得到80个200～1 000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因.结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关.
目的 應用酵母雙雜交及生物信息學(bioinformatics)技術穫得HBxAg蛋白結閤蛋白XBP1,為瞭解該基因的反式調節機製,利用抑製性消減雜交技術篩選併剋隆XBP1蛋白反式激活的靶基因.方法 以XBP1錶達質粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1轉染HepG2細胞,以空載體pcDNA3.1(-)-myc-his(A)為對照；製備轉染後的細胞裂解液,提取mRNA併閤成cDNA,經RsaⅠ酶切後將實驗組cDNA分成兩組,分彆銜接兩種不同接頭,再與對照組cDNA進行兩次消減雜交及兩次PCR反應,產物與T/A剋隆載體連接,構建cDNA消減文庫,併轉染大腸桿菌進行文庫擴增,隨機挑選剋隆經PCR鑒定後進行測序及同源性分析.結果 成功構建人XBP1蛋白反式激活相關基因差異錶達的cDNA.擴增後得到80箇200～1 000 bp插入片段的剋隆,隨機挑選其中30箇插入片段測序,併通過生物信息學分析穫得其全長基因序列,結果共穫得28箇已知編碼序列基因和2箇未知的新基因.結論 XBP1在肝細胞內錶達後能夠上調HepG2細胞中許多不同基因錶達的變化,這些基因與細胞信號轉導、細胞增殖與分化、免疫應答、能量代謝、細胞凋亡、腫瘤髮生等生物過程密切相關.
목적 응용효모쌍잡교급생물신식학(bioinformatics)기술획득HBxAg단백결합단백XBP1,위료해해기인적반식조절궤제,이용억제성소감잡교기술사선병극륭XBP1단백반식격활적파기인.방법 이XBP1표체질립pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1전염HepG2세포,이공재체pcDNA3.1(-)-myc-his(A)위대조；제비전염후적세포렬해액,제취mRNA병합성cDNA,경RsaⅠ매절후장실험조cDNA분성량조,분별함접량충불동접두,재여대조조cDNA진행량차소감잡교급량차PCR반응,산물여T/A극륭재체련접,구건cDNA소감문고,병전염대장간균진행문고확증,수궤도선극륭경PCR감정후진행측서급동원성분석.결과 성공구건인XBP1단백반식격활상관기인차이표체적cDNA.확증후득도80개200～1 000 bp삽입편단적극륭,수궤도선기중30개삽입편단측서,병통과생물신식학분석획득기전장기인서렬,결과공획득28개이지편마서렬기인화2개미지적신기인.결론 XBP1재간세포내표체후능구상조HepG2세포중허다불동기인표체적변화,저사기인여세포신호전도、세포증식여분화、면역응답、능량대사、세포조망、종류발생등생물과정밀절상관.
