实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2011年
14期
1119-1122
,共4页
李兴兰%余章斌%韩树萍%陈玉林%顾筱琪%孙青%郭锡熔
李興蘭%餘章斌%韓樹萍%陳玉林%顧篠琪%孫青%郭錫鎔
리흥란%여장빈%한수평%진옥림%고소기%손청%곽석용
叶酸结合蛋白1%基因克隆%真核表达载体
葉痠結閤蛋白1%基因剋隆%真覈錶達載體
협산결합단백1%기인극륭%진핵표체재체
目的 构建pcDNA3.1.叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因真核表达载体,检测其在肺腺癌A549细胞中的表达.方法 采用反转录.PCR技术从肺腺癌 A549 细胞中扩增Folbp1 基因的完整编码框,将其克隆到真核表达载体 pcDNATM 3.1/myc.His B,脂质体转染肺腺癌 A549细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的肺腺癌 A549细胞株,并利用Western blot法鉴定其表达.结果 PCR扩增Folbp1基因全长编码区,电泳显示其分子大小与823 bp预期值一致;连接产物pMD.Folbp1转化感受态细菌,经氨苄西林筛选,提取质粒鉴定表明插入pMD.18T载体的目的 片段大小和方向正确;重组质粒扩增Folbp1 基因连入pcDNATM 3.1/myc.His B载体,酶切鉴定显示切出约5.1 kb符合载体大小的条带及符合插入片段大小的特异条带;转染pcDNA 3.1.Folbp1重组质粒的肺腺癌 A549细胞株经抗生素G418筛选,Western blot分析显示与预期大小一致的特异性条带.结论 pcDNA 3.1.Folbp1真核表达载体构建成功,并在肺腺癌 A549细胞内过表达,这将为研究Folbp1基因的功能及其肺发育中奠定了良好的基础.
目的 構建pcDNA3.1.葉痠結閤蛋白1(Folbp1)基因真覈錶達載體,檢測其在肺腺癌A549細胞中的錶達.方法 採用反轉錄.PCR技術從肺腺癌 A549 細胞中擴增Folbp1 基因的完整編碼框,將其剋隆到真覈錶達載體 pcDNATM 3.1/myc.His B,脂質體轉染肺腺癌 A549細胞,通過G418篩選,建立穩定轉染的肺腺癌 A549細胞株,併利用Western blot法鑒定其錶達.結果 PCR擴增Folbp1基因全長編碼區,電泳顯示其分子大小與823 bp預期值一緻;連接產物pMD.Folbp1轉化感受態細菌,經氨芐西林篩選,提取質粒鑒定錶明插入pMD.18T載體的目的 片段大小和方嚮正確;重組質粒擴增Folbp1 基因連入pcDNATM 3.1/myc.His B載體,酶切鑒定顯示切齣約5.1 kb符閤載體大小的條帶及符閤插入片段大小的特異條帶;轉染pcDNA 3.1.Folbp1重組質粒的肺腺癌 A549細胞株經抗生素G418篩選,Western blot分析顯示與預期大小一緻的特異性條帶.結論 pcDNA 3.1.Folbp1真覈錶達載體構建成功,併在肺腺癌 A549細胞內過錶達,這將為研究Folbp1基因的功能及其肺髮育中奠定瞭良好的基礎.
목적 구건pcDNA3.1.협산결합단백1(Folbp1)기인진핵표체재체,검측기재폐선암A549세포중적표체.방법 채용반전록.PCR기술종폐선암 A549 세포중확증Folbp1 기인적완정편마광,장기극륭도진핵표체재체 pcDNATM 3.1/myc.His B,지질체전염폐선암 A549세포,통과G418사선,건립은정전염적폐선암 A549세포주,병이용Western blot법감정기표체.결과 PCR확증Folbp1기인전장편마구,전영현시기분자대소여823 bp예기치일치;련접산물pMD.Folbp1전화감수태세균,경안변서림사선,제취질립감정표명삽입pMD.18T재체적목적 편단대소화방향정학;중조질립확증Folbp1 기인련입pcDNATM 3.1/myc.His B재체,매절감정현시절출약5.1 kb부합재체대소적조대급부합삽입편단대소적특이조대;전염pcDNA 3.1.Folbp1중조질립적폐선암 A549세포주경항생소G418사선,Western blot분석현시여예기대소일치적특이성조대.결론 pcDNA 3.1.Folbp1진핵표체재체구건성공,병재폐선암 A549세포내과표체,저장위연구Folbp1기인적공능급기폐발육중전정료량호적기출.
