华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2009年
3期
117-119
,共3页
陈晨%陶泽璋%陈始明%肖伯奎%王燕%陈伟
陳晨%陶澤璋%陳始明%肖伯奎%王燕%陳偉
진신%도택장%진시명%초백규%왕연%진위
腺病毒%质粒%基因治疗
腺病毒%質粒%基因治療
선병독%질립%기인치료
目的 构建表达绿色荧光蛋白(EGFP)和人端粒酶逆转录酶(TERT)、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-xl基因shRNA的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,观察其对喉癌细胞(Hep-2)的感染效果.方法 用基因工程技术将EGFP和TERT、VEGF、Bcl-xl基因短发夹RNA(shRNA)的cDNA从质粒载体pGenesil-1.1上亚克隆至穿梭质粒pENTR-EGFP-VTB上,再通过体外同源重组的方法将EGFP-VEGF-TERT-Bcl-xl shRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上,得到腺病毒载体pGSadeno-EGFP-VTB,将Pac Ⅰ线性化的腺病毒DNA转染HEK293,并在其中包装扩增腺病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所携带EGFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对 Hep-2细胞感染效率的检测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.0×109PFU/ml,对Hep-2细胞有较强感染能力.结论 应用体外同源重组方法成功构建了表达EGFP和TERT-VEGF-Bcl-xl基因shRNA的重组腺病毒载体.
目的 構建錶達綠色熒光蛋白(EGFP)和人耑粒酶逆轉錄酶(TERT)、血管內皮生長因子(VEGF)、Bcl-xl基因shRNA的重組腺病毒載體,併對其相關指標進行鑒定,觀察其對喉癌細胞(Hep-2)的感染效果.方法 用基因工程技術將EGFP和TERT、VEGF、Bcl-xl基因短髮夾RNA(shRNA)的cDNA從質粒載體pGenesil-1.1上亞剋隆至穿梭質粒pENTR-EGFP-VTB上,再通過體外同源重組的方法將EGFP-VEGF-TERT-Bcl-xl shRNA錶達框轉移至pGSadeno腺病毒錶達載體上,得到腺病毒載體pGSadeno-EGFP-VTB,將Pac Ⅰ線性化的腺病毒DNA轉染HEK293,併在其中包裝擴增腺病毒.採用PCR方法對重組腺病毒進行鑒定,利用穿梭質粒中所攜帶EGFP報告基因,進行病毒滴度的測定和對 Hep-2細胞感染效率的檢測.結果 酶切鑒定及PCR結果證明EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重組腺病毒載體構建成功,病毒滴度達1.0×109PFU/ml,對Hep-2細胞有較彊感染能力.結論 應用體外同源重組方法成功構建瞭錶達EGFP和TERT-VEGF-Bcl-xl基因shRNA的重組腺病毒載體.
목적 구건표체록색형광단백(EGFP)화인단립매역전록매(TERT)、혈관내피생장인자(VEGF)、Bcl-xl기인shRNA적중조선병독재체,병대기상관지표진행감정,관찰기대후암세포(Hep-2)적감염효과.방법 용기인공정기술장EGFP화TERT、VEGF、Bcl-xl기인단발협RNA(shRNA)적cDNA종질립재체pGenesil-1.1상아극륭지천사질립pENTR-EGFP-VTB상,재통과체외동원중조적방법장EGFP-VEGF-TERT-Bcl-xl shRNA표체광전이지pGSadeno선병독표체재체상,득도선병독재체pGSadeno-EGFP-VTB,장Pac Ⅰ선성화적선병독DNA전염HEK293,병재기중포장확증선병독.채용PCR방법대중조선병독진행감정,이용천사질립중소휴대EGFP보고기인,진행병독적도적측정화대 Hep-2세포감염효솔적검측.결과 매절감정급PCR결과증명EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA중조선병독재체구건성공,병독적도체1.0×109PFU/ml,대Hep-2세포유교강감염능력.결론 응용체외동원중조방법성공구건료표체EGFP화TERT-VEGF-Bcl-xl기인shRNA적중조선병독재체.
