细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
12期
1149-1151
,共3页
张全爱%齐延红%潘薇薇%何永吉%赵峰梅%杨素萍%赵邑
張全愛%齊延紅%潘薇薇%何永吉%趙峰梅%楊素萍%趙邑
장전애%제연홍%반미미%하영길%조봉매%양소평%조읍
组织因子%人-鼠嵌合抗体%真核表达载体%CHO细胞
組織因子%人-鼠嵌閤抗體%真覈錶達載體%CHO細胞
조직인자%인-서감합항체%진핵표체재체%CHO세포
目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-V_L-V_H,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性.方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-PCR扩增mAb V_L和V_H的基因序列,构建重组真核表达载体pCN40-V_L-V_H,并进行酶切鉴定和测序.通过磷酸钙沉淀法转染CHO细胞,以终浓度800 μg/L G418筛选阳性细胞,通过间接ELISA、Western blot检测细胞培养上清中嵌合抗体的表达量、活性及特异性.结果:成功构建了抗人组织因子嵌合抗体真核共表达载体pCN40-V_L-V_H并在CHO细胞中表达.ELISA、Western blot证实,表达的抗组织因子嵌合抗体为人鼠嵌合抗体,该抗体能与重组人TF抗原特异性的结合且表达量为51.25 mg/L.结论:成功地构建并在真核细胞中表达了抗人组织因子嵌合抗体,为进一步的研究奠定了基础.
目的:構建組織因子人-鼠嵌閤抗體的真覈共錶達載體pCN40-V_L-V_H,併轉染中國倉鼠卵巢細胞(CHO)中進行穩定錶達,以剋服鼠源單剋隆抗體(mAb)用于臨床的跼限性.方法:從分泌鼠抗人的組織因子mAb的雜交瘤細胞株(剋隆號:mTA)中抽提總RNA,經RT-PCR擴增mAb V_L和V_H的基因序列,構建重組真覈錶達載體pCN40-V_L-V_H,併進行酶切鑒定和測序.通過燐痠鈣沉澱法轉染CHO細胞,以終濃度800 μg/L G418篩選暘性細胞,通過間接ELISA、Western blot檢測細胞培養上清中嵌閤抗體的錶達量、活性及特異性.結果:成功構建瞭抗人組織因子嵌閤抗體真覈共錶達載體pCN40-V_L-V_H併在CHO細胞中錶達.ELISA、Western blot證實,錶達的抗組織因子嵌閤抗體為人鼠嵌閤抗體,該抗體能與重組人TF抗原特異性的結閤且錶達量為51.25 mg/L.結論:成功地構建併在真覈細胞中錶達瞭抗人組織因子嵌閤抗體,為進一步的研究奠定瞭基礎.
목적:구건조직인자인-서감합항체적진핵공표체재체pCN40-V_L-V_H,병전염중국창서란소세포(CHO)중진행은정표체,이극복서원단극륭항체(mAb)용우림상적국한성.방법:종분비서항인적조직인자mAb적잡교류세포주(극륭호:mTA)중추제총RNA,경RT-PCR확증mAb V_L화V_H적기인서렬,구건중조진핵표체재체pCN40-V_L-V_H,병진행매절감정화측서.통과린산개침정법전염CHO세포,이종농도800 μg/L G418사선양성세포,통과간접ELISA、Western blot검측세포배양상청중감합항체적표체량、활성급특이성.결과:성공구건료항인조직인자감합항체진핵공표체재체pCN40-V_L-V_H병재CHO세포중표체.ELISA、Western blot증실,표체적항조직인자감합항체위인서감합항체,해항체능여중조인TF항원특이성적결합차표체량위51.25 mg/L.결론:성공지구건병재진핵세포중표체료항인조직인자감합항체,위진일보적연구전정료기출.
