CAJ | 학술논문

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法.对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90 V,分离胶电泳电压为恒压160 V,转印的最佳电压和时间为恒压100 V1.5 h;封闭液为3%BSA时,封闭15 min,封闭效果最好;AH6的最佳稀释度为1∶4 000,4C下孵育过夜,马抗鼠二抗的最佳稀释度1∶1 000,室温下孵育30 min.采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics(R)-CheckWESTERN进口试剂盒的检测结果比较,发现其敏感性为100%,特异性为99.4%,与进口试剂盒(100%,100%)无显著差异,这为国产试剂盒研制提供了条件.
이원단백단항AH6화감성린산매표기적마항서매표이항건립료풍우병화양양병적Western blotting검측방법.대Western blotting각충반응조건진행모색,병학정료최가공작조건,결과표명:균장완충액위RIPA시적최가반응조건포괄농축효전영전압위항압90 V,분리효전영전압위항압160 V,전인적최가전압화시간위항압100 V1.5 h;봉폐액위3%BSA시,봉폐15 min,봉폐효과최호;AH6적최가희석도위1∶4 000,4C하부육과야,마항서이항적최가희석도1∶1 000,실온하부육30 min.채용이학립적반응조건대양품진행검측병여Prionics(R)-CheckWESTERN진구시제합적검측결과비교,발현기민감성위100%,특이성위99.4%,여진구시제합(100%,100%)무현저차이,저위국산시제합연제제공료조건.