生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
2期
161-165
,共5页
唐恒明%刘先凯%高美琴%冯尔玲%朱力%史兆兴%廖祥儒%王恒樑
唐恆明%劉先凱%高美琴%馮爾玲%硃力%史兆興%廖祥儒%王恆樑
당항명%류선개%고미금%풍이령%주력%사조흥%료상유%왕항량
炭疽杆菌%S-层蛋白%基因散除
炭疽桿菌%S-層蛋白%基因散除
탄저간균%S-층단백%기인산제
目的:构建炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体,以进行后续SLP的功能研究,为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立技术平台.方法:利用PCR技术,分别扩增得到目的基因的上游同源臂(slp-F)和下游同源臂(slp-R),将抗性基因(S)和上、下游同源臂先后连入穿梭质粒pKSV7,构建打靶载体pKSV7-FSR,经去甲基化后,电转化入炭疽芽胞杆菌A16R,通过同源重组敲除slp基因,并通过DNA测序和Western blot实验验证;对野生株和突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究.结果:分别从DNA水平和蛋白质水平证实slp基因被成功敲除;突变株对数期生长较快,衰退较慢,与野生株的生化反应差异不明显.结论:获得了炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体.
目的:構建炭疽芽胞桿菌假想S-層蛋白SLP缺失突變體,以進行後續SLP的功能研究,為炭疽芽孢桿菌重要基因功能的研究建立技術平檯.方法:利用PCR技術,分彆擴增得到目的基因的上遊同源臂(slp-F)和下遊同源臂(slp-R),將抗性基因(S)和上、下遊同源臂先後連入穿梭質粒pKSV7,構建打靶載體pKSV7-FSR,經去甲基化後,電轉化入炭疽芽胞桿菌A16R,通過同源重組敲除slp基因,併通過DNA測序和Western blot實驗驗證;對野生株和突變株37℃時的生長麯線及生化反應進行比較研究.結果:分彆從DNA水平和蛋白質水平證實slp基因被成功敲除;突變株對數期生長較快,衰退較慢,與野生株的生化反應差異不明顯.結論:穫得瞭炭疽芽胞桿菌假想S-層蛋白SLP缺失突變體.
목적:구건탄저아포간균가상S-층단백SLP결실돌변체,이진행후속SLP적공능연구,위탄저아포간균중요기인공능적연구건립기술평태.방법:이용PCR기술,분별확증득도목적기인적상유동원비(slp-F)화하유동원비(slp-R),장항성기인(S)화상、하유동원비선후련입천사질립pKSV7,구건타파재체pKSV7-FSR,경거갑기화후,전전화입탄저아포간균A16R,통과동원중조고제slp기인,병통과DNA측서화Western blot실험험증;대야생주화돌변주37℃시적생장곡선급생화반응진행비교연구.결과:분별종DNA수평화단백질수평증실slp기인피성공고제;돌변주대수기생장교쾌,쇠퇴교만,여야생주적생화반응차이불명현.결론:획득료탄저아포간균가상S-층단백SLP결실돌변체.
