寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2011年
3期
139-146
,共8页
李文卉%王建魁%盖文燕%姚菊霞%曲自刚%贾万忠%罗建勋%Radu Blaga%付宝权
李文卉%王建魁%蓋文燕%姚菊霞%麯自剛%賈萬忠%囉建勛%Radu Blaga%付寶權
리문훼%왕건괴%개문연%요국하%곡자강%가만충%라건훈%Radu Blaga%부보권
多头带绦虫%脑多头蚴%cDNA表达文库%表达序列标签
多頭帶縚蟲%腦多頭蚴%cDNA錶達文庫%錶達序列標籤
다두대조충%뇌다두유%cDNA표체문고%표체서렬표첨
从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA,以Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,利用Lambda ZAP II XR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴cDNA表达文库.从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR,确定文库重组率和插入外源基因片段大小,鉴定文库质量.结果表明脑多头蚴cDNA表达文库的原始库容量为1.0×106 pfu,扩增后文库滴度为1.6×109 pfu/mL.随机挑选的165个噬菌斑克隆中,0.25 kb以上的克隆155个,重组率为93.9%,对其中0.5 kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签(EST),分析后得到96个单一EST序列(Unique EST),其中20个EST与绦虫基因有同源性,38个EST与吸虫基因有同源性,4个EST与线虫基因有同源性,17个EST与其他物种有同源性,其余17个EST没有同源基因.这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tm16抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白.
從甘肅景泰羊源腦多頭蚴原頭節提取總RNA,以Oligo(dT)纖維素柱純化mRNA,利用Lambda ZAP II XR文庫構建試劑盒構建瞭腦多頭蚴cDNA錶達文庫.從構建的原始文庫隨機挑選單箇噬菌斑進行PCR,確定文庫重組率和插入外源基因片段大小,鑒定文庫質量.結果錶明腦多頭蚴cDNA錶達文庫的原始庫容量為1.0×106 pfu,擴增後文庫滴度為1.6×109 pfu/mL.隨機挑選的165箇噬菌斑剋隆中,0.25 kb以上的剋隆155箇,重組率為93.9%,對其中0.5 kb以上的115箇剋隆測序共穫得104箇錶達序列標籤(EST),分析後得到96箇單一EST序列(Unique EST),其中20箇EST與縚蟲基因有同源性,38箇EST與吸蟲基因有同源性,4箇EST與線蟲基因有同源性,17箇EST與其他物種有同源性,其餘17箇EST沒有同源基因.這些EST編碼的氨基痠序列有多頭帶縚蟲六鉤蚴Tm16抗原、豬帶縚蟲副肌毬蛋白、豬帶縚蟲免疫原蛋白Ts76等縚蟲抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶類、熱休剋蛋白、肌動蛋白、覈糖體蛋白等同源蛋白.
종감숙경태양원뇌다두유원두절제취총RNA,이Oligo(dT)섬유소주순화mRNA,이용Lambda ZAP II XR문고구건시제합구건료뇌다두유cDNA표체문고.종구건적원시문고수궤도선단개서균반진행PCR,학정문고중조솔화삽입외원기인편단대소,감정문고질량.결과표명뇌다두유cDNA표체문고적원시고용량위1.0×106 pfu,확증후문고적도위1.6×109 pfu/mL.수궤도선적165개서균반극륭중,0.25 kb이상적극륭155개,중조솔위93.9%,대기중0.5 kb이상적115개극륭측서공획득104개표체서렬표첨(EST),분석후득도96개단일EST서렬(Unique EST),기중20개EST여조충기인유동원성,38개EST여흡충기인유동원성,4개EST여선충기인유동원성,17개EST여기타물충유동원성,기여17개EST몰유동원기인.저사EST편마적안기산서렬유다두대조충륙구유Tm16항원、저대조충부기구단백、저대조충면역원단백Ts76등조충항원적동원단백이급희순화매등일사매류、열휴극단백、기동단백、핵당체단백등동원단백.
