CAJ | 학술논문

目的建立能分泌具有中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体(McAb)细胞株,制备有中和活性的抗SARS-CoV McAb,用于SARS-CoV感染的早期特异诊断和进行SARS-CoV结构蛋白的功能研究.方法用灭活纯化SARS-CoV(BJ01株)免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,建立能稳定分泌SARS病毒McAb的杂交瘤细胞系,然后用中和试验进一步筛选分泌具有中和活性的抗SARS-CoVMcAb细胞株.利用SARS-CoV的S和N蛋白的不同长度肽段通过ELISA鉴定McAb的特异结合区域,分析S和N蛋白不同区域诱导产生抗体的能力和特性.结果建立了12株能稳定分泌抗SARS-CoVMcAb的杂交瘤细胞株,间接免疫荧光法检测抗体效价在1:320～1:20 480之间,其中6株具有较好的中和SARS-CoV的能力.具有中和活性的McAb中,3株是针对S蛋白的,2株是针对N蛋白的,其中抗S蛋白的中和抗体活性比抗N蛋白的中和抗体活性高,另外1株可能是针对SARS-CoV的其他结构蛋白的.进一步对6株抗S蛋白的McAb的特异抗原结合表位分析,发现其中3株结合位点在S蛋白第12～311氨基酸之间,2株在第310～535氨基酸之间,后者中和效价高于前者,另1株是针对S2蛋白的,SARS病毒的受体结合区正位于第310～535氨基酸这一区段.具有中和活性的McAb通过间接免疫荧光、ELISA、酶标免疫组化法和胶体金方法对SARS病毒进行检测,都显示出高度的特异性和良好亲和力.结论成功制备了具中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体,并分别测定了McAb对S蛋白和N蛋白的特异抗原结合活性,初步确定了S蛋白的中和表位.为今后SARS病毒的特异诊断、结构蛋白的功能分析和重组疫苗的研制奠定了较好的基础.
목적건립능분비구유중화활성적항SARS-CoV단극륭항체(McAb)세포주,제비유중화활성적항SARS-CoV McAb,용우SARS-CoV감염적조기특이진단화진행SARS-CoV결구단백적공능연구.방법용멸활순화SARS-CoV(BJ01주)면역BALB/c소서,통과세포융합기술,건립능은정분비SARS병독McAb적잡교류세포계,연후용중화시험진일보사선분비구유중화활성적항SARS-CoVMcAb세포주.이용SARS-CoV적S화N단백적불동장도태단통과ELISA감정McAb적특이결합구역,분석S화N단백불동구역유도산생항체적능력화특성.결과건립료12주능은정분비항SARS-CoVMcAb적잡교류세포주,간접면역형광법검측항체효개재1:320～1:20 480지간,기중6주구유교호적중화SARS-CoV적능력.구유중화활성적McAb중,3주시침대S단백적,2주시침대N단백적,기중항S단백적중화항체활성비항N단백적중화항체활성고,령외1주가능시침대SARS-CoV적기타결구단백적.진일보대6주항S단백적McAb적특이항원결합표위분석,발현기중3주결합위점재S단백제12～311안기산지간,2주재제310～535안기산지간,후자중화효개고우전자,령1주시침대S2단백적,SARS병독적수체결합구정위우제310～535안기산저일구단.구유중화활성적McAb통과간접면역형광、ELISA、매표면역조화법화효체금방법대SARS병독진행검측,도현시출고도적특이성화량호친화력.결론성공제비료구중화활성적항SARS-CoV단극륭항체,병분별측정료McAb대S단백화N단백적특이항원결합활성,초보학정료S단백적중화표위.위금후SARS병독적특이진단、결구단백적공능분석화중조역묘적연제전정료교호적기출.