华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2011年
3期
320-325
,共6页
王大勇%方振东%谢朝新%敖漉%肖进文%张春秀
王大勇%方振東%謝朝新%敖漉%肖進文%張春秀
왕대용%방진동%사조신%오록%초진문%장춘수
致病菌%多重PCR检测
緻病菌%多重PCR檢測
치병균%다중PCR검측
目的 探讨致病菌多重PCR检测方法.方法 利用13种在突发公共事件中可能出现在饮用水水源水体中的致病细菌的特异性序列为靶序列,设计了14对特异性引物并分成3组进行多重PCR反应,建立并优化了多重PCR检测体系.结果 通过实验确定适宜的退火温度为66～68℃;3组检测引物的添加比例分别为:第1组引物添加比例为Shi∶Sa∶O157∶Ec∶Sen=1∶1∶1∶2∶3～1∶1∶1∶3∶4,第2组引物添加比例为Lm∶Lp∶Kp∶Hp=1∶1∶4∶1,而第3组引物添加比例为MT∶VC∶BA∶YP∶16S=8∶1∶8∶4∶4;混合引物的用量为0.6～0.8 μL.多重PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到2×10-2 ng/μL;配合浓缩集菌设备,使用研究中建立的多重PCR体系,肠炎沙门菌培养液的检测下限可以达到103 cfu/mL.结论 该多重PCR检测方法操作简单,速度快,灵敏度高,稳定性和重复性好,具有较广阔的应用前景和较大的经济与社会效益.
目的 探討緻病菌多重PCR檢測方法.方法 利用13種在突髮公共事件中可能齣現在飲用水水源水體中的緻病細菌的特異性序列為靶序列,設計瞭14對特異性引物併分成3組進行多重PCR反應,建立併優化瞭多重PCR檢測體繫.結果 通過實驗確定適宜的退火溫度為66～68℃;3組檢測引物的添加比例分彆為:第1組引物添加比例為Shi∶Sa∶O157∶Ec∶Sen=1∶1∶1∶2∶3～1∶1∶1∶3∶4,第2組引物添加比例為Lm∶Lp∶Kp∶Hp=1∶1∶4∶1,而第3組引物添加比例為MT∶VC∶BA∶YP∶16S=8∶1∶8∶4∶4;混閤引物的用量為0.6～0.8 μL.多重PCR的基因組DNA檢測靈敏度可達到2×10-2 ng/μL;配閤濃縮集菌設備,使用研究中建立的多重PCR體繫,腸炎沙門菌培養液的檢測下限可以達到103 cfu/mL.結論 該多重PCR檢測方法操作簡單,速度快,靈敏度高,穩定性和重複性好,具有較廣闊的應用前景和較大的經濟與社會效益.
목적 탐토치병균다중PCR검측방법.방법 이용13충재돌발공공사건중가능출현재음용수수원수체중적치병세균적특이성서렬위파서렬,설계료14대특이성인물병분성3조진행다중PCR반응,건립병우화료다중PCR검측체계.결과 통과실험학정괄의적퇴화온도위66～68℃;3조검측인물적첨가비례분별위:제1조인물첨가비례위Shi∶Sa∶O157∶Ec∶Sen=1∶1∶1∶2∶3～1∶1∶1∶3∶4,제2조인물첨가비례위Lm∶Lp∶Kp∶Hp=1∶1∶4∶1,이제3조인물첨가비례위MT∶VC∶BA∶YP∶16S=8∶1∶8∶4∶4;혼합인물적용량위0.6～0.8 μL.다중PCR적기인조DNA검측령민도가체도2×10-2 ng/μL;배합농축집균설비,사용연구중건립적다중PCR체계,장염사문균배양액적검측하한가이체도103 cfu/mL.결론 해다중PCR검측방법조작간단,속도쾌,령민도고,은정성화중복성호,구유교엄활적응용전경화교대적경제여사회효익.
