科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
4期
523-530
,共8页
徐方娇%李礼君%顾朱益%茅瑶琼%王忠华
徐方嬌%李禮君%顧硃益%茅瑤瓊%王忠華
서방교%리례군%고주익%모요경%왕충화
蔺草%基因组DNA%试剂盒提取法%分离%纯化
藺草%基因組DNA%試劑盒提取法%分離%純化
린초%기인조DNA%시제합제취법%분리%순화
以来自宁波高桥种质资源圃中的15个蔺草样品为材料,进行了基因组DNA提取条件的优化研究,结果表明:加入Proteinase K后,DNA的浓度普遍在600μg/mL以上,A260/A280值在1.8-2.0之间,浓度随加入量的增加呈递增状态,在加入量为6μL时提取效果最好.Proteinase K水浴温度与时间的条件优化试验中发现,最佳的水浴温度为65℃,水浴时间以30 min,离心条件在转速10,000 r/min,时间8 min时获得的DNA质量较好.加入RNase A后,A260/A280瑚值在1.8-2.0之间,随加入量的增加纯度也增大,加入量以3μL为宜;RNase A水浴时间在10 min时A260/A280值普遍最接近1.8,浓度也较高.应用所获得的优化提取条件对宁波市高桥镇种植的15个蔺草样品进行提取DNA测试,电泳结果表明所有品种都出现了特异性DNA条带.由此,在进行蔺草实生苗基因组DNA提取时,建议采用如下条件:Proteinase K加入量6μL,水浴温度为65℃,时间为30 min;第一步DNA沉淀的离心转速为10,000r/min,离心时间为8 min.RNase A加入量3μL;RNase A水浴时间10 min.
以來自寧波高橋種質資源圃中的15箇藺草樣品為材料,進行瞭基因組DNA提取條件的優化研究,結果錶明:加入Proteinase K後,DNA的濃度普遍在600μg/mL以上,A260/A280值在1.8-2.0之間,濃度隨加入量的增加呈遞增狀態,在加入量為6μL時提取效果最好.Proteinase K水浴溫度與時間的條件優化試驗中髮現,最佳的水浴溫度為65℃,水浴時間以30 min,離心條件在轉速10,000 r/min,時間8 min時穫得的DNA質量較好.加入RNase A後,A260/A280瑚值在1.8-2.0之間,隨加入量的增加純度也增大,加入量以3μL為宜;RNase A水浴時間在10 min時A260/A280值普遍最接近1.8,濃度也較高.應用所穫得的優化提取條件對寧波市高橋鎮種植的15箇藺草樣品進行提取DNA測試,電泳結果錶明所有品種都齣現瞭特異性DNA條帶.由此,在進行藺草實生苗基因組DNA提取時,建議採用如下條件:Proteinase K加入量6μL,水浴溫度為65℃,時間為30 min;第一步DNA沉澱的離心轉速為10,000r/min,離心時間為8 min.RNase A加入量3μL;RNase A水浴時間10 min.
이래자저파고교충질자원포중적15개린초양품위재료,진행료기인조DNA제취조건적우화연구,결과표명:가입Proteinase K후,DNA적농도보편재600μg/mL이상,A260/A280치재1.8-2.0지간,농도수가입량적증가정체증상태,재가입량위6μL시제취효과최호.Proteinase K수욕온도여시간적조건우화시험중발현,최가적수욕온도위65℃,수욕시간이30 min,리심조건재전속10,000 r/min,시간8 min시획득적DNA질량교호.가입RNase A후,A260/A280호치재1.8-2.0지간,수가입량적증가순도야증대,가입량이3μL위의;RNase A수욕시간재10 min시A260/A280치보편최접근1.8,농도야교고.응용소획득적우화제취조건대저파시고교진충식적15개린초양품진행제취DNA측시,전영결과표명소유품충도출현료특이성DNA조대.유차,재진행린초실생묘기인조DNA제취시,건의채용여하조건:Proteinase K가입량6μL,수욕온도위65℃,시간위30 min;제일보DNA침정적리심전속위10,000r/min,리심시간위8 min.RNase A가입량3μL;RNase A수욕시간10 min.
