中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
12期
1398-1403
,共6页
袁子国%张秀香%李修明%王晓虎%高胜言%徐惠娟%张守峰%扈荣良
袁子國%張秀香%李脩明%王曉虎%高勝言%徐惠娟%張守峰%扈榮良
원자국%장수향%리수명%왕효호%고성언%서혜연%장수봉%호영량
伪狂犬病病毒%狂犬病痛毒糖蛋白%同源重组%PK-15细胞
偽狂犬病病毒%狂犬病痛毒糖蛋白%同源重組%PK-15細胞
위광견병병독%광견병통독당단백%동원중조%PK-15세포
构建以伪狂犬病病毒(PRV)为栽体表达狂犬病病毒糖蛋白的重组活裁体疫苗.采用Ase Ⅰ/Mlu Ⅰ切下EG-FP-rgp的表达盒,将其克隆入p8-AA载体的酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8-EGFP/rgp.将该质粒与PRV TK-/gI-基因组在质脂体介导下共转染PK-15细胞,获得PRV-EGFP/rgp重组病毒;通过噬斑克隆对其进行筛选、纯化,并通过RT-PCR、Southern-blot、Western-blot和间接免疫荧光对其进行鉴定,并对重组病毒的滴度、外源基因的遗传稳定性及其与亲本病毒株生长特性的关系进行了测定.结果表明:重组病毒的滴度(TCID50)为108.125/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;PRV-EGFP/rgp与亲本病毒PRV TK-/gI-生长趋势差异不显著.通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组PRV的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制提供了新的思路和方法.
構建以偽狂犬病病毒(PRV)為栽體錶達狂犬病病毒糖蛋白的重組活裁體疫苗.採用Ase Ⅰ/Mlu Ⅰ切下EG-FP-rgp的錶達盒,將其剋隆入p8-AA載體的酶切位點處,經酶切鑒定為正嚮連接,暘性重組子命名為p8-EGFP/rgp.將該質粒與PRV TK-/gI-基因組在質脂體介導下共轉染PK-15細胞,穫得PRV-EGFP/rgp重組病毒;通過噬斑剋隆對其進行篩選、純化,併通過RT-PCR、Southern-blot、Western-blot和間接免疫熒光對其進行鑒定,併對重組病毒的滴度、外源基因的遺傳穩定性及其與親本病毒株生長特性的關繫進行瞭測定.結果錶明:重組病毒的滴度(TCID50)為108.125/mL;外源基因在細胞內得到瞭有效的錶達,併具有良好的免疫反應性和遺傳穩定性;PRV-EGFP/rgp與親本病毒PRV TK-/gI-生長趨勢差異不顯著.通過構建錶達狂犬病病毒糖蛋白正嚮重組PRV的活載體疫苗的研製,為狂犬病疫苗的研製提供瞭新的思路和方法.
구건이위광견병병독(PRV)위재체표체광견병병독당단백적중조활재체역묘.채용Ase Ⅰ/Mlu Ⅰ절하EG-FP-rgp적표체합,장기극륭입p8-AA재체적매절위점처,경매절감정위정향련접,양성중조자명명위p8-EGFP/rgp.장해질립여PRV TK-/gI-기인조재질지체개도하공전염PK-15세포,획득PRV-EGFP/rgp중조병독;통과서반극륭대기진행사선、순화,병통과RT-PCR、Southern-blot、Western-blot화간접면역형광대기진행감정,병대중조병독적적도、외원기인적유전은정성급기여친본병독주생장특성적관계진행료측정.결과표명:중조병독적적도(TCID50)위108.125/mL;외원기인재세포내득도료유효적표체,병구유량호적면역반응성화유전은정성;PRV-EGFP/rgp여친본병독PRV TK-/gI-생장추세차이불현저.통과구건표체광견병병독당단백정향중조PRV적활재체역묘적연제,위광견병역묘적연제제공료신적사로화방법.
