热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
10期
995-998
,共4页
陈雪艳%付玉才%李璐%耿艺介%黄达娜%高世同%张仁利
陳雪豔%付玉纔%李璐%耿藝介%黃達娜%高世同%張仁利
진설염%부옥재%리로%경예개%황체나%고세동%장인리
弓形虫%Calpain-like基因%基因克隆%蛋白表达
弓形蟲%Calpain-like基因%基因剋隆%蛋白錶達
궁형충%Calpain-like기인%기인극륭%단백표체
目的 克隆弓形虫RH株Calpain-like基因片段,构建原核表达载体,诱导表达Calpain-like基因重组蛋白.方法 收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA,在设计合成的引物中引入Sal I和EcoR I酶切位点.应用RT-PCR扩增弓形虫RH株Calpain-like基因片段,插入pGEM-T载体,提取重组质粒,双酶切获得目的基因,亚克隆到原核表达质粒pET32a,重组子经双酶切、PCR和DNA序列分析鉴定,转化大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达.结果 从弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增出316 bp的Calpain-like基因片段;含pET32a/Calpain-like的重组质粒在宿主菌经诱导后,获得与预期分子量相符的表达产物.结论 成功地克隆和表达弓形虫RH株Calpain-like基因,弓形虫Calpain-like基因的克隆表达为进一步筛选弓形虫疫苗候选分子和治疗药物的靶位提供了研究基础.
目的 剋隆弓形蟲RH株Calpain-like基因片段,構建原覈錶達載體,誘導錶達Calpain-like基因重組蛋白.方法 收集、純化弓形蟲RH株速殖子,提取總RNA,在設計閤成的引物中引入Sal I和EcoR I酶切位點.應用RT-PCR擴增弓形蟲RH株Calpain-like基因片段,插入pGEM-T載體,提取重組質粒,雙酶切穫得目的基因,亞剋隆到原覈錶達質粒pET32a,重組子經雙酶切、PCR和DNA序列分析鑒定,轉化大腸桿菌BL21併以IPTG誘導錶達.結果 從弓形蟲RH株速殖子cDNA中擴增齣316 bp的Calpain-like基因片段;含pET32a/Calpain-like的重組質粒在宿主菌經誘導後,穫得與預期分子量相符的錶達產物.結論 成功地剋隆和錶達弓形蟲RH株Calpain-like基因,弓形蟲Calpain-like基因的剋隆錶達為進一步篩選弓形蟲疫苗候選分子和治療藥物的靶位提供瞭研究基礎.
목적 극륭궁형충RH주Calpain-like기인편단,구건원핵표체재체,유도표체Calpain-like기인중조단백.방법 수집、순화궁형충RH주속식자,제취총RNA,재설계합성적인물중인입Sal I화EcoR I매절위점.응용RT-PCR확증궁형충RH주Calpain-like기인편단,삽입pGEM-T재체,제취중조질립,쌍매절획득목적기인,아극륭도원핵표체질립pET32a,중조자경쌍매절、PCR화DNA서렬분석감정,전화대장간균BL21병이IPTG유도표체.결과 종궁형충RH주속식자cDNA중확증출316 bp적Calpain-like기인편단;함pET32a/Calpain-like적중조질립재숙주균경유도후,획득여예기분자량상부적표체산물.결론 성공지극륭화표체궁형충RH주Calpain-like기인,궁형충Calpain-like기인적극륭표체위진일보사선궁형충역묘후선분자화치료약물적파위제공료연구기출.
