暨南大学学报(自然科学与医学版)
暨南大學學報(自然科學與醫學版)
기남대학학보(자연과학여의학판)
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
4期
331-335
,共5页
卢宏松%徐丽慧%施焕敬%韩捷%何贤辉
盧宏鬆%徐麗慧%施煥敬%韓捷%何賢輝
로굉송%서려혜%시환경%한첩%하현휘
FMS样酪氨酸激酶3配体%胞外域%原核表达%组氨酸标签
FMS樣酪氨痠激酶3配體%胞外域%原覈錶達%組氨痠標籤
FMS양락안산격매3배체%포외역%원핵표체%조안산표첨
目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:依据FIt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆FIt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定.结果:克隆到FIt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的FIt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的FIt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应.结论:成功克隆FIt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.
目的:構建含組氨痠標籤的FMS樣酪氨痠激酶3配體(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)胞外域蛋白的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中進行錶達.方法:依據FIt3L基因序列設計引物,以RT-PCR的方法從小鼠脾髒總RNA中剋隆FIt3L基因併構建其胞外域原覈錶達載體,測序鑒定後在大腸桿菌BL21(DE3)菌株中誘導錶達,用免疫印跡鑒定.結果:剋隆到FIt3L編碼區全長序列,經DNA測序證明與已報道的序列相同;構建羧基耑帶有His6標籤的FIt3L胞外域蛋白的原覈錶達載體,轉化大腸桿菌後SDS-PAGE分析顯示在BL21(ED3)中穫得較高錶達;免疫印跡分析錶明IPTG誘導後錶達的FIt3L胞外域蛋白的相對分子質量(Mr)為19 000,與理論值相符,此蛋白與抗His6標籤的抗體髮生特異性反應.結論:成功剋隆FIt3L基因,構建其胞外域蛋白的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中穫得錶達.
목적:구건함조안산표첨적FMS양락안산격매3배체(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)포외역단백적원핵표체재체,병재대장간균중진행표체.방법:의거FIt3L기인서렬설계인물,이RT-PCR적방법종소서비장총RNA중극륭FIt3L기인병구건기포외역원핵표체재체,측서감정후재대장간균BL21(DE3)균주중유도표체,용면역인적감정.결과:극륭도FIt3L편마구전장서렬,경DNA측서증명여이보도적서렬상동;구건최기단대유His6표첨적FIt3L포외역단백적원핵표체재체,전화대장간균후SDS-PAGE분석현시재BL21(ED3)중획득교고표체;면역인적분석표명IPTG유도후표체적FIt3L포외역단백적상대분자질량(Mr)위19 000,여이론치상부,차단백여항His6표첨적항체발생특이성반응.결론:성공극륭FIt3L기인,구건기포외역단백적원핵표체재체,병재대장간균중획득표체.
