CAJ | 학술논문

目的:克隆内皮素1(endothelin 1,ET1)基因、表达ET1融合蛋白,以期诱导机体产生ETI抗体,中和患者体内过量的ET1.方法:根据人ET1的多肽序列合成ET1基因,将其插入到pThioHisA的EcoRI和SalI位点,重组质粒pThioHisA-ET1进行酶切鉴定及序列测定验证后转化TOP10,IPTG诱导的重组菌经SDS-PAGE检测融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量;表达的融合蛋白用ProBond亲合层析纯化并经HPLC鉴测其纯度;每只小鼠按25、50、100μg/次剂量的Thioredoxin-ET1每两周免疫一次,共4次,最后一次免疫10d后制备抗血清,经Western blot和ELISA检测证明Thioredoxin-ET1融合蛋白具有ET1免疫反应原性.结果:经过质粒酶切鉴定及序列分析表明,构建了正确的融合表达载体pThioHisA-ET1,用1mmol IPTG诱导工程菌,融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量占菌体总蛋白的50%,多以包涵体的形式存在,包涵体经洗涤,变性和复性后.用ProBond亲合层析纯化得到了Thioredoxin-ET1融合蛋白,经HPLC鉴测其纯度为90%.制备的抗血清中ET1抗体的效价可达104.结论:应用Thioredoxin-ET1融合蛋白可以诱发机体产生ET1抗体,为研究ET1在患者体内的过量表达及对患者的免疫治疗开辟了新的途径.
목적:극륭내피소1(endothelin 1,ET1)기인、표체ET1융합단백,이기유도궤체산생ETI항체,중화환자체내과량적ET1.방법:근거인ET1적다태서렬합성ET1기인,장기삽입도pThioHisA적EcoRI화SalI위점,중조질립pThioHisA-ET1진행매절감정급서렬측정험증후전화TOP10,IPTG유도적중조균경SDS-PAGE검측융합단백Thioredoxin-ET1적표체량;표체적융합단백용ProBond친합층석순화병경HPLC감측기순도;매지소서안25、50、100μg/차제량적Thioredoxin-ET1매량주면역일차,공4차,최후일차면역10d후제비항혈청,경Western blot화ELISA검측증명Thioredoxin-ET1융합단백구유ET1면역반응원성.결과:경과질립매절감정급서렬분석표명,구건료정학적융합표체재체pThioHisA-ET1,용1mmol IPTG유도공정균,융합단백Thioredoxin-ET1적표체량점균체총단백적50%,다이포함체적형식존재,포함체경세조,변성화복성후.용ProBond친합층석순화득도료Thioredoxin-ET1융합단백,경HPLC감측기순도위90%.제비적항혈청중ET1항체적효개가체104.결론:응용Thioredoxin-ET1융합단백가이유발궤체산생ET1항체,위연구ET1재환자체내적과량표체급대환자적면역치료개벽료신적도경.