CAJ | 학술논문

目的:建立不同辅助亚基与功能亚基重组体瞬时表达的N型钙离子通道细胞模型,观察不同亚基组成的N型钙离子通道的电学特征,揭示不同辅助亚基对功能亚基的调节作用.方法:将N型钙离子通道亚基α1B/α2δ/β1b的cDNA分别体外转录为cRNA后,注射至去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞中,表达48 h后使用双电极电压钳技术记录其电流.结果:向注射N型钙通道cRNA的细胞以一系列去极化刺激可诱发90%的细胞记录到内向电流.其电流可被N型钙离子通道特异性拮抗剂ω-CTX MVⅡA (1 μmol/L)完全阻断.α1B单独表达时可形成功能性N型钙离子通道,通过记录到电流后而得出电流-电压曲线(I-V曲线),可知产生电流峰值的膜电压约为20 mV(21.17±1.44)mV(n=7);α1B/β1b共表达时I-V曲线方向为超极化,电流达到峰值的电压为(12.35±0.88) mV(n=7,P＜0.01);功能亚基与α2δ亚基共表达时,I-V曲线稍向正电位方向,电流达到峰值的电压为(23.25±1.25) mV(n=7,P＜0.01);在α1B/α2δ/β1b共表达时,尽管有α2δ亚基存在时,β1b亚基仍显著地使I-V曲线向超级化方向(17.08±1.86) mV(n=7).本实验也观察了不同重组体电流的稳态失活电压,其中α1B表达电流的半数失活电压为-12.0 mV,α1B/α2δ表达电流的半数失活电压为-13.5 mV,α1B/β1b表达电流的半数失活电压为-51.4 mV,而α1B/α2δ/β1b共表达时电流半数失活电压为-54.9 mV.结论:成功地建立不同亚基组成的N型钙离子通道在爪蟾卵母细胞的功能性表达,不同的辅助亚基与功能亚基组合体现了通道不同的动力学特性,表明N型钙通道在体内可能具有功能的多样性.这些结果为今后深入研究N型钙通道奠定了基础.
목적:건립불동보조아기여공능아기중조체순시표체적N형개리자통도세포모형,관찰불동아기조성적N형개리자통도적전학특정,게시불동보조아기대공능아기적조절작용.방법:장N형개리자통도아기α1B/α2δ/β1b적cDNA분별체외전록위cRNA후,주사지거제려포막적비주조섬란모세포중,표체48 h후사용쌍전겁전압겸기술기록기전류.결과:향주사N형개통도cRNA적세포이일계렬거겁화자격가유발90%적세포기록도내향전류.기전류가피N형개리자통도특이성길항제ω-CTX MVⅡA (1 μmol/L)완전조단.α1B단독표체시가형성공능성N형개리자통도,통과기록도전류후이득출전류-전압곡선(I-V곡선),가지산생전류봉치적막전압약위20 mV(21.17±1.44)mV(n=7);α1B/β1b공표체시I-V곡선방향위초겁화,전류체도봉치적전압위(12.35±0.88) mV(n=7,P＜0.01);공능아기여α2δ아기공표체시,I-V곡선초향정전위방향,전류체도봉치적전압위(23.25±1.25) mV(n=7,P＜0.01);재α1B/α2δ/β1b공표체시,진관유α2δ아기존재시,β1b아기잉현저지사I-V곡선향초급화방향(17.08±1.86) mV(n=7).본실험야관찰료불동중조체전류적은태실활전압,기중α1B표체전류적반수실활전압위-12.0 mV,α1B/α2δ표체전류적반수실활전압위-13.5 mV,α1B/β1b표체전류적반수실활전압위-51.4 mV,이α1B/α2δ/β1b공표체시전류반수실활전압위-54.9 mV.결론:성공지건립불동아기조성적N형개리자통도재조섬란모세포적공능성표체,불동적보조아기여공능아기조합체현료통도불동적동역학특성,표명N형개통도재체내가능구유공능적다양성.저사결과위금후심입연구N형개통도전정료기출.