CAJ | 학술논문

目的:采用自体嗅黏膜作为组织供体修复脊髓损伤,从形态学和行为学角度验证嗅成鞘细胞移植治疗脊髓损伤的作用及效果,为应用自体嗅成鞘细胞移植治疗临床脊髓损伤提供实验依据.方法:实验于2002-06/2004-10在北京大学基础医学院解剖学与组织胚胎学系中枢神经发育与再生研究室完成.选取清洁级6周龄雄性SD大鼠18只,随机分为自体嗅黏膜移植组10只,冻融对照组8只.两组均建立脊髓损伤模型,自体嗅黏膜移植组取位于鼻中隔后上部的嗅黏膜移植于脊髓损伤处,冻融对照组将自体嗅黏膜冷冻于-20℃冰箱5 min,取出后室温放置5 min解冻,重复5次后将冻融自体嗅黏膜移植于脊髓损伤处.术后6周于脊髓损伤节段上下各5 mm处取材,片厚20μm.然后两组分别以神经丝蛋白和神经生长因子受体蛋白免疫荧光双标染色、激光共聚焦显微镜检测移植效果.免疫组织化学染色观察移植嗅黏膜与周围组织的生长情况.通过BBB行为学评分对两组动物后肢恢复功能进行评估.结果:实验选取SD大鼠18只,全部进入结果分析.①免疫组织化学摄片观察移植细胞在脊髓组织中再生情况:自体嗅黏膜移植组有部分空洞形成,但有部分神经纤维穿过移植区,可见神经生长因子受体蛋白免疫反应阳性的嗅成鞘细胞呈束状排列.冻融对照组无再生纤维通过且形成较大空洞,神经生长因子受体蛋白p75免疫组化反应阴性.②两组大鼠的神经丝蛋白和神经生长因子受体蛋白免疫荧光双标染色结果:自体嗅黏膜移植组免疫荧光标记纤维中夹有神经生长因子受体蛋白p75标记的存活的嗅成鞘细胞,细胞随标记的神经丝蛋白纤维走行方向排列,与宿主组织愈合良好.冻融对照组未见神经生长因子受体蛋白p75标记的嗅成鞘细胞以及神经丝蛋白标记的再生纤维,且形成较大空洞.③两组大鼠手术前后行为学评分结果:与冻融对照组比较,术后2,3,4,5,6周自体嗅黏膜移植组BBB行为学评分显著升高[(3.8±0.7),(5.6±1.4);(4.1±0.6),(9.7±1.3);(4.6±1.7),(12.5±1.2);(5.8±0.9),(13.5±0.9);(6.3±0.9),(13.8±0.9)分;P＜0.05或0.01].结论:嗅黏膜移植以及其中的嗅成鞘细胞对大鼠脊髓损伤修复具有明显的促进作用,并可恢复损伤神经的部分功能.同时自体嗅黏膜移植还有助于脊髓损伤部位神经纤维的再生. 目的:採用自體嗅黏膜作為組織供體脩複脊髓損傷,從形態學和行為學角度驗證嗅成鞘細胞移植治療脊髓損傷的作用及效果,為應用自體嗅成鞘細胞移植治療臨床脊髓損傷提供實驗依據.方法:實驗于2002-06/2004-10在北京大學基礎醫學院解剖學與組織胚胎學繫中樞神經髮育與再生研究室完成.選取清潔級6週齡雄性SD大鼠18隻,隨機分為自體嗅黏膜移植組10隻,凍融對照組8隻.兩組均建立脊髓損傷模型,自體嗅黏膜移植組取位于鼻中隔後上部的嗅黏膜移植于脊髓損傷處,凍融對照組將自體嗅黏膜冷凍于-20℃冰箱5 min,取齣後室溫放置5 min解凍,重複5次後將凍融自體嗅黏膜移植于脊髓損傷處.術後6週于脊髓損傷節段上下各5 mm處取材,片厚20μm.然後兩組分彆以神經絲蛋白和神經生長因子受體蛋白免疫熒光雙標染色、激光共聚焦顯微鏡檢測移植效果.免疫組織化學染色觀察移植嗅黏膜與週圍組織的生長情況.通過BBB行為學評分對兩組動物後肢恢複功能進行評估.結果:實驗選取SD大鼠18隻,全部進入結果分析.①免疫組織化學攝片觀察移植細胞在脊髓組織中再生情況:自體嗅黏膜移植組有部分空洞形成,但有部分神經纖維穿過移植區,可見神經生長因子受體蛋白免疫反應暘性的嗅成鞘細胞呈束狀排列.凍融對照組無再生纖維通過且形成較大空洞,神經生長因子受體蛋白p75免疫組化反應陰性.②兩組大鼠的神經絲蛋白和神經生長因子受體蛋白免疫熒光雙標染色結果:自體嗅黏膜移植組免疫熒光標記纖維中夾有神經生長因子受體蛋白p75標記的存活的嗅成鞘細胞,細胞隨標記的神經絲蛋白纖維走行方嚮排列,與宿主組織愈閤良好.凍融對照組未見神經生長因子受體蛋白p75標記的嗅成鞘細胞以及神經絲蛋白標記的再生纖維,且形成較大空洞.③兩組大鼠手術前後行為學評分結果:與凍融對照組比較,術後2,3,4,5,6週自體嗅黏膜移植組BBB行為學評分顯著升高[(3.8±0.7),(5.6±1.4);(4.1±0.6),(9.7±1.3);(4.6±1.7),(12.5±1.2);(5.8±0.9),(13.5±0.9);(6.3±0.9),(13.8±0.9)分;P＜0.05或0.01].結論:嗅黏膜移植以及其中的嗅成鞘細胞對大鼠脊髓損傷脩複具有明顯的促進作用,併可恢複損傷神經的部分功能.同時自體嗅黏膜移植還有助于脊髓損傷部位神經纖維的再生.
목적:채용자체후점막작위조직공체수복척수손상,종형태학화행위학각도험증후성초세포이식치료척수손상적작용급효과,위응용자체후성초세포이식치료림상척수손상제공실험의거.방법:실험우2002-06/2004-10재북경대학기출의학원해부학여조직배태학계중추신경발육여재생연구실완성.선취청길급6주령웅성SD대서18지,수궤분위자체후점막이식조10지,동융대조조8지.량조균건립척수손상모형,자체후점막이식조취위우비중격후상부적후점막이식우척수손상처,동융대조조장자체후점막냉동우-20℃빙상5 min,취출후실온방치5 min해동,중복5차후장동융자체후점막이식우척수손상처.술후6주우척수손상절단상하각5 mm처취재,편후20μm.연후량조분별이신경사단백화신경생장인자수체단백면역형광쌍표염색、격광공취초현미경검측이식효과.면역조직화학염색관찰이식후점막여주위조직적생장정황.통과BBB행위학평분대량조동물후지회복공능진행평고.결과:실험선취SD대서18지,전부진입결과분석.①면역조직화학섭편관찰이식세포재척수조직중재생정황:자체후점막이식조유부분공동형성,단유부분신경섬유천과이식구,가견신경생장인자수체단백면역반응양성적후성초세포정속상배렬.동융대조조무재생섬유통과차형성교대공동,신경생장인자수체단백p75면역조화반응음성.②량조대서적신경사단백화신경생장인자수체단백면역형광쌍표염색결과:자체후점막이식조면역형광표기섬유중협유신경생장인자수체단백p75표기적존활적후성초세포,세포수표기적신경사단백섬유주행방향배렬,여숙주조직유합량호.동융대조조미견신경생장인자수체단백p75표기적후성초세포이급신경사단백표기적재생섬유,차형성교대공동.③량조대서수술전후행위학평분결과:여동융대조조비교,술후2,3,4,5,6주자체후점막이식조BBB행위학평분현저승고[(3.8±0.7),(5.6±1.4);(4.1±0.6),(9.7±1.3);(4.6±1.7),(12.5±1.2);(5.8±0.9),(13.5±0.9);(6.3±0.9),(13.8±0.9)분;P＜0.05혹0.01].결론:후점막이식이급기중적후성초세포대대서척수손상수복구유명현적촉진작용,병가회복손상신경적부분공능.동시자체후점막이식환유조우척수손상부위신경섬유적재생.