CAJ | 학술논문

凝胶阻滞实验(gel retardation),又称为电泳迁移率变动实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA),是研究蛋白和DNA相互作用的一种技术.传统的32P标记探针的凝胶阻滞实验,具有很高的灵敏度,然而也有接触危险性的放射性同位素且不容易定量分析的缺点.最近利用非放射性标记的凝胶阻滞实验,已有很多成功的报道,该方法快捷,安全,灵活,但非放射性标记探针的凝胶阻滞试剂盒的费用却很高.在论文中,我们提供了一种改造地高辛标记DNA和检测试剂盒用于凝胶阻滞实验的新方法.首先将双链DNA探针末端引入EcoRⅠ粘性末端以便进行3′末端标记,然后利用价格比较便宜的地高辛标记DNA和检测试剂盒(DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ, Rohe) 进行探针标记和凝胶阻滞信号检测.经过多次实验参数的摸索,最终得到了成功的结果,为利用地高辛标记DNA和检测试剂盒进行凝胶阻滞实验提供了成功的例子和方法.
응효조체실험(gel retardation),우칭위전영천이솔변동실험(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA),시연구단백화DNA상호작용적일충기술.전통적32P표기탐침적응효조체실험,구유흔고적령민도,연이야유접촉위험성적방사성동위소차불용역정량분석적결점.최근이용비방사성표기적응효조체실험,이유흔다성공적보도,해방법쾌첩,안전,령활,단비방사성표기탐침적응효조체시제합적비용각흔고.재논문중,아문제공료일충개조지고신표기DNA화검측시제합용우응효조체실험적신방법.수선장쌍련DNA탐침말단인입EcoRⅠ점성말단이편진행3′말단표기,연후이용개격비교편의적지고신표기DNA화검측시제합(DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ, Rohe) 진행탐침표기화응효조체신호검측.경과다차실험삼수적모색,최종득도료성공적결과,위이용지고신표기DNA화검측시제합진행응효조체실험제공료성공적례자화방법.