中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2006年
2期
375-381
,共7页
耐热菌%苹果浓缩汁%竞争定量PCR
耐熱菌%蘋果濃縮汁%競爭定量PCR
내열균%평과농축즙%경쟁정량PCR
[目的]研究苹果浓缩汁中耐热菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)的定量PCR快速检测法.[方法]通过引物设计、PCR扩增及凝胶纯化试剂盒回收,构建并获得耐热菌的PCR竞争模板;用获得的竞争模板作为定量内标物建立耐热菌的竞争定量PCR(QC-PCR)检测体系.[结果]经对建立的QC-PCR检测体系优化,目标模板检测灵敏度由5×104个分子/PCR 体系,提高到50个分子/PCR 体系,竞争模板和目标模板分子共扩增可检测到5×102个目标模板分子/PCR 体系,并能从人工回添苹果浓缩汁样品中定量检测到5×103 cfu/ PCR体系的耐热菌,整个检测时间为4～5 h,比传统的细菌培养皿培养记数法时间(4～5 d)大大缩短.[结论]本研究建立的耐热菌竞争定量PCR检测法特异、快速,可作为微生物PCR竞争模板构建和建立竞争定量PCR的方法学参考,也可用于商品果汁和苹果浓缩汁工业化生产中耐热菌的快速检测和质量安全控制.
[目的]研究蘋果濃縮汁中耐熱菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)的定量PCR快速檢測法.[方法]通過引物設計、PCR擴增及凝膠純化試劑盒迴收,構建併穫得耐熱菌的PCR競爭模闆;用穫得的競爭模闆作為定量內標物建立耐熱菌的競爭定量PCR(QC-PCR)檢測體繫.[結果]經對建立的QC-PCR檢測體繫優化,目標模闆檢測靈敏度由5×104箇分子/PCR 體繫,提高到50箇分子/PCR 體繫,競爭模闆和目標模闆分子共擴增可檢測到5×102箇目標模闆分子/PCR 體繫,併能從人工迴添蘋果濃縮汁樣品中定量檢測到5×103 cfu/ PCR體繫的耐熱菌,整箇檢測時間為4～5 h,比傳統的細菌培養皿培養記數法時間(4～5 d)大大縮短.[結論]本研究建立的耐熱菌競爭定量PCR檢測法特異、快速,可作為微生物PCR競爭模闆構建和建立競爭定量PCR的方法學參攷,也可用于商品果汁和蘋果濃縮汁工業化生產中耐熱菌的快速檢測和質量安全控製.
[목적]연구평과농축즙중내열균(Alicyclobacillus acidoterrestris)적정량PCR쾌속검측법.[방법]통과인물설계、PCR확증급응효순화시제합회수,구건병획득내열균적PCR경쟁모판;용획득적경쟁모판작위정량내표물건립내열균적경쟁정량PCR(QC-PCR)검측체계.[결과]경대건립적QC-PCR검측체계우화,목표모판검측령민도유5×104개분자/PCR 체계,제고도50개분자/PCR 체계,경쟁모판화목표모판분자공확증가검측도5×102개목표모판분자/PCR 체계,병능종인공회첨평과농축즙양품중정량검측도5×103 cfu/ PCR체계적내열균,정개검측시간위4～5 h,비전통적세균배양명배양기수법시간(4～5 d)대대축단.[결론]본연구건립적내열균경쟁정량PCR검측법특이、쾌속,가작위미생물PCR경쟁모판구건화건립경쟁정량PCR적방법학삼고,야가용우상품과즙화평과농축즙공업화생산중내열균적쾌속검측화질량안전공제.
