免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2006年
2期
213-216
,共4页
朱健琦%刘志刚%高波%吉坤美%邢苗
硃健琦%劉誌剛%高波%吉坤美%邢苗
주건기%류지강%고파%길곤미%형묘
粉尘螨%变应原%表达%纯化
粉塵螨%變應原%錶達%純化
분진만%변응원%표체%순화
目的获得大量具有良好的IgE结合活性的DerfⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究.方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18).经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Derf2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性.结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段.序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同.使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签.表达质粒在E.coli BL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性.结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展DerfⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础.
目的穫得大量具有良好的IgE結閤活性的DerfⅡ重組變應原,以促進粉塵螨變態反應性疾病的特異性診斷及治療的研究.方法挑取經純培養的粉塵螨,提取總RNA,採用RT-PCR的方法擴增Der fⅡ片段,產物連接進入T載體(pMD18).經擴增後,用NdeⅠ和XhoⅠ雙酶切後將目的片段連接到pET-24a錶達載體上,得到重組質粒pET-Derf2,工程菌經IPTG誘導培養,明顯錶達齣Der fⅡ蛋白,錶達產物經固定化金屬配體親和層析純化,用Western blot檢測免疫學活性.結果成功提取粉塵螨的總RNA,擴增齣編碼129箇氨基痠的長度為387箇堿基對的覈苷痠片段.序列分析結果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6箇堿基不同.使用高效錶達的原覈載體pET,所得產物的5′耑含有抗原性極小的6箇組氨痠標籤.錶達質粒在E.coli BL21 star中得到高效錶達,錶達產物主要以包涵體形式存在,目的蛋白具有良好的變應原性.結論成功構建瞭粉塵螨Ⅱ類變應原的原覈錶達載體,併純化瞭具有免疫特性的重組蛋白,為進一步開展DerfⅡ蛋白和重組疫苗研究奠定瞭基礎.
목적획득대량구유량호적IgE결합활성적DerfⅡ중조변응원,이촉진분진만변태반응성질병적특이성진단급치료적연구.방법도취경순배양적분진만,제취총RNA,채용RT-PCR적방법확증Der fⅡ편단,산물련접진입T재체(pMD18).경확증후,용NdeⅠ화XhoⅠ쌍매절후장목적편단련접도pET-24a표체재체상,득도중조질립pET-Derf2,공정균경IPTG유도배양,명현표체출Der fⅡ단백,표체산물경고정화금속배체친화층석순화,용Western blot검측면역학활성.결과성공제취분진만적총RNA,확증출편마129개안기산적장도위387개감기대적핵감산편단.서렬분석결과화Genebank상적기인서렬(D10448)동원성98%,기중유6개감기불동.사용고효표체적원핵재체pET,소득산물적5′단함유항원성겁소적6개조안산표첨.표체질립재E.coli BL21 star중득도고효표체,표체산물주요이포함체형식존재,목적단백구유량호적변응원성.결론성공구건료분진만Ⅱ류변응원적원핵표체재체,병순화료구유면역특성적중조단백,위진일보개전DerfⅡ단백화중조역묘연구전정료기출.
