重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2004年
1期
76-78
,共3页
基因克隆%组织纤溶酶原激活物%真核表达质粒载体
基因剋隆%組織纖溶酶原激活物%真覈錶達質粒載體
기인극륭%조직섬용매원격활물%진핵표체질립재체
目的利用基因工程技术克隆组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种无细胞毒性、不激活原癌基因的真核表达的pcDNA3.1t-PA质粒载体.方法采用高效Trizol试剂快速从人肺组织中提取RNA,RT-PCR获得t-PA cDNA,扩增、纯化、回收t-PA基因片段并将质粒pcDNA3.1和t-PA基因片段分别双酶切,前者纯化回收大片段,后者纯化回收1.9kb片段,再将回收的pcDNA3.1大片段与t-PA基因片段(1.9kb)重组.对重组pcDNA3.1t-PA质粒进行单酶切和双酶切鉴定,并测序.结果成功地从胎儿肺组织中克隆了t-PA基因,并构建了以pcDNA3.1为载体的真核表达质粒载体.结论含t-PA基因新型表达质粒构建的成功将为基因防治血管重建术中局部血栓形成奠定基础.
目的利用基因工程技術剋隆組織纖溶酶原激活物(t-PA)基因併構建一種無細胞毒性、不激活原癌基因的真覈錶達的pcDNA3.1t-PA質粒載體.方法採用高效Trizol試劑快速從人肺組織中提取RNA,RT-PCR穫得t-PA cDNA,擴增、純化、迴收t-PA基因片段併將質粒pcDNA3.1和t-PA基因片段分彆雙酶切,前者純化迴收大片段,後者純化迴收1.9kb片段,再將迴收的pcDNA3.1大片段與t-PA基因片段(1.9kb)重組.對重組pcDNA3.1t-PA質粒進行單酶切和雙酶切鑒定,併測序.結果成功地從胎兒肺組織中剋隆瞭t-PA基因,併構建瞭以pcDNA3.1為載體的真覈錶達質粒載體.結論含t-PA基因新型錶達質粒構建的成功將為基因防治血管重建術中跼部血栓形成奠定基礎.
목적이용기인공정기술극륭조직섬용매원격활물(t-PA)기인병구건일충무세포독성、불격활원암기인적진핵표체적pcDNA3.1t-PA질립재체.방법채용고효Trizol시제쾌속종인폐조직중제취RNA,RT-PCR획득t-PA cDNA,확증、순화、회수t-PA기인편단병장질립pcDNA3.1화t-PA기인편단분별쌍매절,전자순화회수대편단,후자순화회수1.9kb편단,재장회수적pcDNA3.1대편단여t-PA기인편단(1.9kb)중조.대중조pcDNA3.1t-PA질립진행단매절화쌍매절감정,병측서.결과성공지종태인폐조직중극륭료t-PA기인,병구건료이pcDNA3.1위재체적진핵표체질립재체.결론함t-PA기인신형표체질립구건적성공장위기인방치혈관중건술중국부혈전형성전정기출.
